兔NT-4ELISA試劑盒說明書實驗規(guī)則：
1、將液體加到酶標孔中時,，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,，液滴會自然流下去,。       
2、液體全部加完后,，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒,，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能,。
3,、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板,，防止水分的蒸發(fā),。
4、洗板時,，每次洗液加入后,，應靜置1分鐘，使清洗更加*,。沒有洗板機時,，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干,。
5,、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4,，0.02M的磷酸緩沖液,，加入0.1%的吐溫6作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
洗板方法：
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,，浸泡1-2分鐘,。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次,。
自動洗板：如果有自動洗板機,，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

兔NT-4ELISA試劑盒說明書計算：
以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標,，   
在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD     
值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋     
倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標     
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值     
代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋     
倍數(shù)，即為樣品的實際濃度,。

兔NT-4ELISA試劑盒說明書樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應再次離心。
2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實行,。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,。檢測細胞內的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。
5. 組織標本：切割標本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。