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大鼠Apo-B48ELISA試劑盒實驗科研實驗規(guī)則:
1、將液體加到酶標(biāo)孔中時,避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去,。
2、液體全部加完后,,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒,,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能,。
3,、溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,,防止水分的蒸發(fā),。
4、洗板時,,每次洗液加入后,,應(yīng)靜置1分鐘,,使清洗更加*。沒有洗板機(jī)時,,倒去液體后,,要將酶標(biāo)板在報紙或毛紙上用力拍干。
5,、洗液不夠時,,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,,加入0.1%的吐溫6作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存,。
洗板方法:
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),,浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,,重復(fù)此過程數(shù)次,。
自動洗板:如果有自動洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中,。
大鼠Apo-B48ELISA試劑盒實驗科研計算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),,OD值為縱坐標(biāo),
在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,,根據(jù)樣品的OD
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,;再乘以稀釋
倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值
代入方程式,,計算出樣品濃度,再乘以稀釋
倍數(shù),,即為樣品的實際濃度,。
大鼠Apo-B48ELISA試劑盒實驗科研樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心,。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量,。加入一定量的PBS,,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用,。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗,。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
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