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大鼠Apo-B48ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)科研實(shí)驗(yàn)規(guī)則:
1、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),,避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,,液滴會(huì)自然流下去,。
2,、液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒,,混勻液體,。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。
3,、溫浴時(shí),,要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,,防止水分的蒸發(fā)。
4,、洗板時(shí),,每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,,使清洗更加*,。沒有洗板機(jī)時(shí),倒去液體后,,要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。
5,、洗液不夠時(shí),,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,,加入0.1%的吐溫6作為洗液,。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。
洗板方法:
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),,浸泡1-2分鐘,。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次,。
自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。
大鼠Apo-B48ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)科研計(jì)算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),,OD值為縱坐標(biāo),,
在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,;再乘以稀釋
倍數(shù),;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值
代入方程式,,計(jì)算出樣品濃度,,再乘以稀釋
倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度,。
大鼠Apo-B48ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)科研樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,,應(yīng)再次離心,。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)該再次離心,。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融,,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,,稱取重量。加入一定量的PBS,,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用,。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
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