ATP酶免檢測,，三磷酸腺苷ELISA含量檢測方法

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。

2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于10%和15% ,。

檢測范圍：                                              

200 nmol/L - 6400 nmol/L

靈敏度：                                              

低檢測濃度小于10 nmol/L

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；,。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外,。
4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘,。
5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。
7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
8. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
9. 測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

實(shí)驗(yàn)原理：

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠三磷酸腺苷（ATP）水平,。用純化的小鼠三磷酸腺苷（ATP）捕獲抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被的微孔中依次加入小鼠三磷酸腺苷（ATP）,，再與HRP標(biāo)記的檢測抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的小鼠三磷酸腺苷（ATP）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠三磷酸腺苷（ATP）含量,。