ELISA試劑盒試驗固相載體的選擇：很多物質(zhì)可作為固相載體,，如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。
包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時,，懇求純度要好,吸附時通常懇求PH在9.0～9.6之間。
吸附溫度,，時間及其蛋白量也有一定影響,通常多選用4℃ 18～24小時,。
有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)留心防護(hù),。
其方法可所以凹孔平板,、試管、珠粒等,。
如今常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。
不管何種載體，在運用前均可進(jìn)行選擇：用等量抗原包被,，在同一試驗條件下進(jìn)行反應(yīng)，查詢其顯色反應(yīng)是不是均一性,，據(jù)此判明其吸附功能是不是出色,。
正式試驗時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,，待檢樣品應(yīng)作一式二份,，以保證試驗作用的性。

ELISA試劑盒試驗條件的選擇
在ELISA中,，進(jìn)行各項試驗條件的選擇是很首要的,，其間包括:
有條件者應(yīng)運用不致癌、靈敏度高的供氫體,，如TMB和ABTS是如今較為滿意的供氫體,。
底物作用一段時間后，應(yīng)參與強酸或強堿以中止反應(yīng)。
通常底物作用時間,，以10-30分鐘為宜,。
底物運用液有必要新鮮制造，尤其是H2O2在臨用前參與,。
然后再固定其它條件或采納“方陣法”（包被物,、待檢樣品的參看品及酶符號抗體分別為不一樣的稀釋度）在正式試驗系統(tǒng)里地滴定其工作濃度。
有時本底較高,，說明有非特異性反應(yīng),，可選用羊血清、兔血清或BSA等封閉,。
酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇懇求是價廉,、安全、有明顯地顯色反應(yīng),，而本身無色,。
蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不一樣的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后,，在其它試驗條件相一起,，查詢陽性標(biāo)本的OD值。
選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度,。關(guān)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml,。

ELISA試劑盒試驗酶符號抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行開始效價的滴定（見酶符號抗體部份）。