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大腦中動(dòng)脈阻塞 (middle cerebral artery occlusion,，MCAO) 是目前常用的局灶性腦缺血模型,，MCAO模型先阻斷頸外動(dòng)脈（ECA）及其分支,，且阻斷翼腭動(dòng)脈（PPA）,，以切斷顱外來(lái)源的側(cè)副循環(huán)血流,。從ECA插入MCAO模型線栓尼龍線,，經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA）到大腦前動(dòng)脈（ACA）,，機(jī)械性阻斷大腦中動(dòng)脈（MCA）發(fā)出處的血供來(lái)建立大腦中動(dòng)脈缺血模型,。此模型可在無(wú)麻醉狀態(tài)下拔出尼龍線，恢復(fù)血流,，實(shí)現(xiàn)再灌注,。 線栓法具有不開(kāi)顱、效果肯定,、可準(zhǔn)確控制缺血及再灌注時(shí)間的優(yōu)點(diǎn),，用于研究神經(jīng)元對(duì)缺血的敏感性、耐受性,，藥物療效觀察以及再灌注損害和治療時(shí)間窗較為理想,，同時(shí)也具有對(duì)全身影響小、動(dòng)物存活時(shí)間長(zhǎng)的特點(diǎn),，適于慢性腦損傷的研究,。控制好易變因素,，可避免實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不穩(wěn)定性,。

1、主要器材

（1）缺血前準(zhǔn)備：腦立體定位儀,、小鼠或大鼠適配器,、微量注射泵、微量注射器,、顱鉆

（2）缺血模型制作：氣體麻醉機(jī),、異氟烷、體視顯微鏡,、冷光源,、手術(shù)臺(tái)、術(shù)后保溫箱,、腦模具,、手術(shù)器械包

（3）缺血模型評(píng)價(jià)：神經(jīng)功能評(píng)價(jià)法（BBB評(píng)分）、TTC染色,、病理學(xué)評(píng)價(jià)

（4）缺血后行為檢測(cè)：抓力測(cè)試儀,、轉(zhuǎn)棒儀

2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

（1）SPF級(jí)Wistar大鼠,，健康,，雄性，體重為250-300g

（2）SPF級(jí)C57小鼠,，健康,，雄性，體重為18-25g

3,、實(shí)驗(yàn)分組

實(shí)驗(yàn)分六組：正常對(duì)照組,、模型組、陽(yáng)性藥組,、受試藥組三個(gè)劑量組,，每組15只動(dòng)物。

4,、建模方法（以大鼠為例）

（1）1.5-2%異氟烷氣體麻醉大鼠,，頸部備皮，消毒,，插入肛溫探頭,，保持體溫在37±0.5℃。

（2）頸部正中切口,，暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈,，頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈。使用6-0絲線在距離頸總動(dòng)脈分叉4mm處結(jié)扎頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)心端,，在頸外動(dòng)脈穿入另一根6-0絲線,，在靠近頸總動(dòng)脈分叉處打一個(gè)活結(jié)。

（3）使用動(dòng)脈夾夾閉頸總動(dòng)脈,。在距離頸總動(dòng)脈分叉處3mm處的頸外動(dòng)脈上剪一個(gè)小口,，將一根頭端處理過(guò)的0.33mm直徑的尼龍線從小口中插入，進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈,，并向內(nèi)插入大腦中動(dòng)脈,，尼龍線的插入深度距離頸總動(dòng)脈分叉處約16±1mm,。

（4）缺血后90min拔掉線栓，用6-0絲線結(jié)扎外動(dòng)脈近心端,，用3-0絲線縫合頸部傷口,，活力碘消毒傷口，將大鼠放在加熱墊上,，待清醒后放入恒溫?fù)狃B(yǎng)箱飼養(yǎng),。

（5）術(shù)后24h，對(duì)小鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分,，然后繼續(xù)麻醉大鼠,，取大腦切片、進(jìn)行TTC染色和病理染色,。

5,、模型的評(píng)價(jià)

（1）神經(jīng)功能缺失體征評(píng)分

參考Longa及Bederson的5分制法在動(dòng)物麻醉清醒后24h進(jìn)行評(píng)分，分值越高,說(shuō)明動(dòng)物行為障礙越嚴(yán)重,。

0分：無(wú)神經(jīng)損傷癥狀

1分：不能*伸展對(duì)側(cè)前爪

2分：向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈

3分：向?qū)?cè)傾倒

4分：不能自發(fā)行走,意識(shí)喪失

（2）TTC染色

麻醉大鼠后,，取大鼠腦組織，放入-20℃冰箱冷凍30min,。用PBS配置1%TTC（W/V）,，37℃水浴至TTC溶解，將凍好的腦組織切片,，置于10mlTTC溶液中,，37℃恒溫孵育10min。不時(shí)翻動(dòng)腦片,，使組織均勻染色,。正常腦染色后呈鮮紅，而梗死區(qū)呈蒼白,。

（3）病理學(xué)評(píng)價(jià)

取腦后用4%多聚甲醛溶液固定,，蔗糖溶液脫水后經(jīng)固定，蔗糖溶液脫水后經(jīng)固定,，蔗糖溶液脫水后經(jīng)OCT包埋做冰凍切片,，包埋做冰凍切片，10um,，做尼氏染色,，做尼氏染色可做梗死面積的評(píng)價(jià)。