您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)
線栓法大腦中動脈阻塞（MCAO）造模解決方案
大腦中動脈阻塞 (middle cerebral artery occlusion,，MCAO) 是目前常用的局灶性腦缺血模型,，MCAO模型先阻斷頸外動脈（ECA）及其分支,，且阻斷翼腭動脈（PPA）,，以切斷顱外來源的側副循環(huán)血流,。從ECA插入MCAO模型線栓尼龍線,，經(jīng)頸內動脈（ICA）到大腦前動脈（ACA）,，機械性阻斷大腦中動脈（MCA）發(fā)出處的血供來建立大腦中動脈缺血模型,。此模型可在無麻醉狀態(tài)下拔出尼龍線，恢復血流,，實現(xiàn)再灌注,。 線栓法具有不開顱、效果肯定,、可準確控制缺血及再灌注時間的優(yōu)點,，用于研究神經(jīng)元對缺血的敏感性、耐受性,，藥物療效觀察以及再灌注損害和治療時間窗較為理想,，同時也具有對全身影響小、動物存活時間長的特點,，適于慢性腦損傷的研究,。控制好易變因素,，可避免實驗結果的不穩(wěn)定性,。
1、主要器材
（1）缺血前準備：腦立體定位儀,、小鼠或大鼠適配器,、微量注射泵、微量注射器,、顱鉆
（2）缺血模型制作：氣體麻醉機,、異氟烷、體視顯微鏡,、冷光源,、手術臺、術后保溫箱,、腦模具,、手術器械包
（3）缺血模型評價：神經(jīng)功能評價法（BBB評分）、TTC染色,、病理學評價
（4）缺血后行為檢測：抓力測試儀,、轉棒儀
2、實驗動物
（1）SPF級Wistar大鼠,，健康,，雄性,，體重為250-300g
（2）SPF級C57小鼠，健康,，雄性,，體重為18-25g
3、實驗分組
實驗分六組：正常對照組,、模型組,、陽性藥組、受試藥組三個劑量組,，每組15只動物,。
4、建模方法（以大鼠為例）
（1）1.5-2%異氟烷氣體麻醉大鼠,，頸部備皮,，消毒，插入肛溫探頭,，保持體溫在37±0.5℃,。
（2）頸部正中切口，暴露右側頸總動脈,，頸內動脈和頸外動脈,。使用6-0絲線在距離頸總動脈分叉4mm處結扎頸外動脈遠心端，在頸外動脈穿入另一根6-0絲線,，在靠近頸總動脈分叉處打一個活結,。
（3）使用動脈夾夾閉頸總動脈。在距離頸總動脈分叉處3mm處的頸外動脈上剪一個小口,，將一根頭端處理過的0.33mm直徑的尼龍線從小口中插入,，進入頸內動脈，并向內插入大腦中動脈,，尼龍線的插入深度距離頸總動脈分叉處約16±1mm,。
（4）缺血后90min拔掉線栓，用6-0絲線結扎外動脈近心端,，用3-0絲線縫合頸部傷口,，活力碘消毒傷口，將大鼠放在加熱墊上,，待清醒后放入恒溫撫養(yǎng)箱飼養(yǎng),。
（5）術后24h，對小鼠進行神經(jīng)功能評分,，然后繼續(xù)麻醉大鼠,，取大腦切片、進行TTC染色和病理染色。
5,、模型的評價
（1）神經(jīng)功能缺失體征評分
參考Longa及Bederson的5分制法在動物麻醉清醒后24h進行評分,，分值越高,說明動物行為障礙越嚴重。
0分：無神經(jīng)損傷癥狀
1分：不能*伸展對側前爪
2分：向對側轉圈
3分：向對側傾倒
4分：不能自發(fā)行走,意識喪失
（2）TTC染色
麻醉大鼠后,，取大鼠腦組織,，放入-20℃冰箱冷凍30min。用PBS配置1%TTC（W/V）,，37℃水浴至TTC溶解,，將凍好的腦組織切片，置于10mlTTC溶液中,，37℃恒溫孵育10min,。不時翻動腦片,，使組織均勻染色,。正常腦染色后呈鮮紅，而梗死區(qū)呈蒼白,。
（3）病理學評價
取腦后用4%多聚甲醛溶液固定,，蔗糖溶液脫水后經(jīng)固定，蔗糖溶液脫水后經(jīng)固定,，蔗糖溶液脫水后經(jīng)OCT包埋做冰凍切片,，包埋做冰凍切片，10um,，做尼氏染色,，做尼氏染色可做梗死面積的評價。