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藥典級(jí)牛津杯測(cè)定抗生素的抑菌實(shí)驗(yàn)
 

一,、目的：觀察抗生素的抑菌效果,，掌握藥典級(jí)牛津杯體外測(cè)定抗生素的抗菌活性,。 
二,、原理： 抗生素從孔洞向瓊脂培養(yǎng)基擴(kuò)散滲透,，通過對(duì)試驗(yàn)菌的抑殺作用而影響細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖，使菌落形成抑菌圈,，依抑菌圈的大小確定抗生素抗菌能力的強(qiáng)弱,。
三、材料 
1. 菌種：金黃色葡萄球菌,，用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)16~18 h得到的菌液,。
2. 藥品：氨芐青霉素,，肉湯培養(yǎng)基,。 
3. 器材：藥典級(jí)牛津杯、涂布棒,、生化培養(yǎng)箱,、高壓蒸汽滅菌鍋,、水浴鍋、滅菌肉湯瓊脂培養(yǎng)基,、酒精燈,、平皿、吸管,、0.5cm紙片,、鑷子、記號(hào)筆,、尺子等,。 
四、實(shí)驗(yàn)步驟 
1.按照培養(yǎng)基的配制方法步驟配制好肉湯培養(yǎng)基,，并在121℃,，滅菌20 min后，放在60 ℃水浴鍋中保溫,，注意溫度恒定,，不要讓培養(yǎng)基凝固。 
2. 將用于試驗(yàn)的防腐劑（抑菌物質(zhì)）配制成2個(gè)所需的濃度（10ug/ml,30ug/ml）,。
3.將已經(jīng)培養(yǎng)好的菌制成一定濃度（106cfu/mL）的懸浮液,，用移液管移取1 mL該菌懸液至滅過菌的（121℃，20分鐘）培養(yǎng)皿中,，倒入15 mL已滅菌的培養(yǎng)基（溫度約45℃,，用手摸瓶壁不感覺燙手即可），輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿,，使培養(yǎng)基與菌液混勻,，靜置凝成平板。 
4.將凝固后的平板用滅菌后的打孔器在平板上打孔（4個(gè)孔洞）,，并挑出培養(yǎng)基,。（或?qū)⒁褱缇乃幍浼?jí)牛津杯依次輕輕放置在平板上） 
5.按照順時(shí)針方向依次在每個(gè)孔洞（或藥典級(jí)牛津杯）中加入抑菌劑，以無(wú)菌水做空白對(duì)照,，每種抑菌劑的濃度做三個(gè)平行樣,。 
6.在37 ℃下培養(yǎng)24 h觀察，用尺子測(cè)量抑菌圈的大小,。
五,、注意事項(xiàng) 
1.應(yīng)在無(wú)菌條件下操作，試驗(yàn)完畢后及時(shí)滅菌處理,。
2.添加抑菌劑的時(shí)候注意滴到其他地方,，以免影響觀察。