如何用牛津杯做微生物抑菌試驗(yàn)藥敏實(shí)驗(yàn)
抑菌試驗(yàn)/藥敏實(shí)驗(yàn)方法主要有兩種,,即擴(kuò)散法和稀釋法。其中擴(kuò)散法屬手工測(cè)試方法,,通過測(cè)試藥物紙片或者牛津杯在固體培養(yǎng)基上的抑菌圈的大小,,判斷細(xì)菌對(duì)該種藥物是否敏感。
稀釋法包括試管稀釋法和微量稀釋法,,通過測(cè)試細(xì)菌在含不同濃度藥物培養(yǎng)基內(nèi)的生長(zhǎng)情況,,判斷其zui低抑菌濃度(MIC)。
由于擴(kuò)散法操作簡(jiǎn)單,,成本低,,已經(jīng)被大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室和基層單位所采用。擴(kuò)散法又包括紙片法,、牛津杯法和打孔法,。
一、實(shí)驗(yàn)原理
1,、將培養(yǎng)基平板置培養(yǎng)箱中培養(yǎng),,一方面試驗(yàn)菌(指示菌)開始生長(zhǎng)繁殖;另一方面抗生素呈球面擴(kuò)散,,形成遞減的梯度濃度,,離杯越近,抗生素濃度越大,,離杯越遠(yuǎn)抗生素濃度越小,。
2,、在牛津杯周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細(xì)菌的生長(zhǎng)被抑制,形成透明的抑菌圈,。
3,、抑菌圈的大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度(藥敏實(shí)驗(yàn))或藥物對(duì)指示細(xì)菌的抑菌程度(抑菌試驗(yàn))。
4,、抗生素濃度越高,,抑菌圈越大。
5,、在抑菌圈的邊緣處,,瓊脂培養(yǎng)基中所含抑菌物質(zhì)的濃度即為該菌懸液中對(duì)該種指示菌的zui低抑菌濃度(MIC) 。
6,、抑菌圈直徑與藥物對(duì)測(cè)試菌的zui低抑菌濃度 呈負(fù)相關(guān),,即抑菌圈愈大,MIC愈小,。
二,、實(shí)驗(yàn)材料
培養(yǎng)基:牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基
菌種:大腸桿菌(E.coli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)
藥品:阿莫西林,、黃芪多糖、
其他:牛津杯,、培養(yǎng)皿,、酒精棉、酒精燈,、涂布器,、移液槍、1mL,、200uL槍頭,、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái),、接種環(huán)
“牛津杯”可從北京吉泰遠(yuǎn)成科技有限公司采購(gòu),,牛津杯是內(nèi)徑為6mm,外徑為7.8mm,,高10mm的圓筒形管子,,管子的重量盡可能相等。
三,、實(shí)驗(yàn)操作
1. 倒平板:將已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基加熱到*融化,,倒在培養(yǎng)皿內(nèi),每皿約20ml,凝固,。
2. 標(biāo)記:菌種、牛津杯擺放位置,、藥物及其 濃度
3. 制備菌懸液:用生理鹽水洗下試管內(nèi)的菌苔并稀釋,。
4. 菌液涂布:吸取1mL 菌液入平板表面,用涂布器涂布將菌液涂布均勻
5. 擺放牛津杯:在培養(yǎng)基表面垂直擺放牛津杯,,輕輕加壓,,使其與培養(yǎng)基接觸無空隙。