蛋白層析純化系統(tǒng)集凝膠過濾,、分配層析和吸附層析于一體,,適合于親脂性小分子化合物的純化,能將結(jié)構(gòu)性能非常相近的有機物進行分離,,尤其適合中草藥中具有生理活性有效成分的分離,。
蛋白層析純化系統(tǒng)的選擇及使用:
針對實驗室級別的蛋白純化層析系統(tǒng)進行介紹,蛋白純化層析系統(tǒng)為模板,,對蛋白純化層析系統(tǒng)的硬件及軟件部分,,例如系統(tǒng)泵、buffer選擇閥,、收集系統(tǒng),、檢測器、柱前柱后壓等如何選擇及工作原理進行詳細的講解,。
1,、蛋白純化層析系統(tǒng)與HPLC的區(qū)別。
2,、硬件各部分的選擇,。
3、定量環(huán),、定量杯的安裝及使用,,定量環(huán)、定量杯,、系統(tǒng)泵,、樣品泵上樣的優(yōu)點。
4,、系統(tǒng)中壓力產(chǎn)生的原因,,如何保護層析柱。
5,、延遲體積對峰型及收集的影響,。
蛋白層析純化系統(tǒng)的操作步驟:
1.打開電腦,進入AKTA系統(tǒng),。
2.打開AKTA電源,,連接系統(tǒng)。
3進入UniCorn系統(tǒng),。
4.用水洗A泵,。
5.設(shè)置層析柱的壓力上限及適當?shù)牧魉佟?/div>
6.將Superdex200TM層析柱或Superdex75TM層析柱與FPLC連接。
7.用至少1個柱體積的水沖洗層析柱,。
8.用至少1個柱體積的緩沖溶液平衡層析柱,。
9.將準備好的樣品于4℃,12000rpm離心10-20min,。
10.在Load狀態(tài)下通過上樣環(huán)上樣,。
11.在Inject狀態(tài)下樣品進入系統(tǒng),并在2mL時調(diào)回Load狀態(tài),。
緩沖液(流動相)和樣品流過柱子,,分子進入不同的材料孔中。小一些的分子移動的距離更,。
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