蛋白層析純化系統(tǒng)集凝膠過濾、分配層析和吸附層析于一體,,適合于親脂性小分子化合物的純化,,能將結(jié)構(gòu)性能非常相近的有機(jī)物進(jìn)行分離,尤其適合中草藥中具有生理活性有效成分的分離,。
蛋白層析純化系統(tǒng)的選擇及使用:
針對(duì)實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的蛋白純化層析系統(tǒng)進(jìn)行介紹,,蛋白純化層析系統(tǒng)為模板,對(duì)蛋白純化層析系統(tǒng)的硬件及軟件部分,,例如系統(tǒng)泵,、buffer選擇閥、收集系統(tǒng),、檢測器,、柱前柱后壓等如何選擇及工作原理進(jìn)行詳細(xì)的講解,。
1、蛋白純化層析系統(tǒng)與HPLC的區(qū)別,。
2,、硬件各部分的選擇。
3,、定量環(huán),、定量杯的安裝及使用,定量環(huán),、定量杯,、系統(tǒng)泵、樣品泵上樣的優(yōu)點(diǎn),。
4,、系統(tǒng)中壓力產(chǎn)生的原因,如何保護(hù)層析柱,。
5,、延遲體積對(duì)峰型及收集的影響。
蛋白層析純化系統(tǒng)的操作步驟:
1.打開電腦,,進(jìn)入AKTA系統(tǒng),。
2.打開AKTA電源,連接系統(tǒng),。
3進(jìn)入U(xiǎn)niCorn系統(tǒng),。
4.用水洗A泵。
5.設(shè)置層析柱的壓力上限及適當(dāng)?shù)牧魉佟?/div>
6.將Superdex200TM層析柱或Superdex75TM層析柱與FPLC連接,。
7.用至少1個(gè)柱體積的水沖洗層析柱,。
8.用至少1個(gè)柱體積的緩沖溶液平衡層析柱。
9.將準(zhǔn)備好的樣品于4℃,,12000rpm離心10-20min,。
10.在Load狀態(tài)下通過上樣環(huán)上樣。
11.在Inject狀態(tài)下樣品進(jìn)入系統(tǒng),,并在2mL時(shí)調(diào)回Load狀態(tài),。
緩沖液(流動(dòng)相)和樣品流過柱子,分子進(jìn)入不同的材料孔中,。小一些的分子移動(dòng)的距離更,。
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