酶標(biāo)儀檢測(cè)單位:
酶標(biāo)儀光通過被檢測(cè)物,,前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量,,特定波長(zhǎng)下,,同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系,。
酶標(biāo)儀檢測(cè)單位用OD值表,OD是opticaldelnsity(光密度)的縮寫,,表示被檢測(cè)物吸收掉的光密度,,OD=10g(1/trans),其中trans為檢測(cè)物的透光值,。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則,,OD值與光強(qiáng)度下述系:
E=OD=logⅠ0/Ⅰ其中E表被吸收的光密度,Ⅰ0為在檢測(cè)物之前的光強(qiáng)度,,Ⅰ為從被檢測(cè)物出來的光強(qiáng)度,。
OD值由下述公式計(jì)算:
E=OD=C×D×E
其中:C為檢測(cè)物的濃度;D為檢測(cè)物的厚度,;E為摩爾子,。
在特定波長(zhǎng)下測(cè)定每一種物質(zhì)都有其特定的波長(zhǎng),,在此波長(zhǎng)下,此物質(zhì)能夠吸收最多的光能量,。如果選擇其它的波長(zhǎng)段,,就會(huì)造檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。此,,在測(cè)定檢測(cè)物時(shí),,我們選擇特定的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè),稱為測(cè)量波長(zhǎng),。但是每一種物質(zhì)對(duì)光能量還存在一定的非特異性吸收,,為了消除這種非特異性吸收,我們?cè)龠x取一個(gè)參照波長(zhǎng),,以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性,。在參照波長(zhǎng)下,檢測(cè)物光的吸收最小,。檢測(cè)波長(zhǎng)和參照波長(zhǎng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收,。
酶標(biāo)儀檢測(cè)值計(jì)算
酶標(biāo)儀中的檢測(cè)器接收透過被檢測(cè)物的光能量,轉(zhuǎn)換成二進(jìn)位數(shù)字信號(hào),,最大為4095.酶標(biāo)儀定義沒有光源下的透光值為0%,,沒有檢測(cè)物的透光值為100%。則實(shí)際檢測(cè)中,,檢測(cè)物的透光值均在0%一100%之間,。
酶標(biāo)儀透光值的計(jì)算如下:
T=(Meas-Min)/(Max-Min)
其中T為透光值,Meas為檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值,,Min為在0%的情下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值,Max為在100%的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值,,舉例如下:
酶標(biāo)儀的中心定位
酶標(biāo)儀會(huì)自動(dòng)對(duì)酶標(biāo)儀酶標(biāo)孔進(jìn)行中心定位,,中心定位是要消除酶標(biāo)儀酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測(cè)的不準(zhǔn)確。在對(duì)每一個(gè)酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí),,儀器其實(shí)要進(jìn)行35個(gè)點(diǎn)的測(cè)量,,選取最中間的5個(gè)點(diǎn)的均值為本孔的OD值。
酶標(biāo)儀光源的參照通道
參照通道是用來校準(zhǔn)由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來的影響,。酶標(biāo)儀的用途和其它提示酶標(biāo)儀用于ELISA試劑的測(cè)定,,廣泛用于各種實(shí)驗(yàn)室,包括臨床實(shí)驗(yàn)室,。
酶標(biāo)儀質(zhì)量控制
酶標(biāo)儀質(zhì)量控制是試劑檢測(cè)的重要因素,。請(qǐng)按照試劑說明書的要求進(jìn)行質(zhì)量控制。酶標(biāo)儀空白校正有一些試劑盒的說陰書將空白孔設(shè)置為空氣,,其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來設(shè)置的,,請(qǐng)按照試劑盒的說明書要求進(jìn)行,。酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果的解釋由于有相當(dāng)多的因素會(huì)影響檢測(cè)的結(jié)果,如不同的酶標(biāo)儀酶標(biāo)板,,檢測(cè)試劑的體積,,都會(huì)造成OD值的不,因此,,只有使用同一酶標(biāo)儀酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測(cè)結(jié)果才能比較和分析,。
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