分離純化某一特定蛋白質(zhì)的一般程序可以分為前處理、粗分級(jí),、細(xì)分級(jí)三步,。
1.前處理：分離純化某種蛋白質(zhì)，首先要把蛋白質(zhì)從原來(lái)的組織或細(xì)胞中以溶解的狀態(tài)釋放出來(lái)并保持原來(lái)的天然狀態(tài),，不丟失生物活性,。為此，動(dòng)物材料應(yīng)先提出結(jié)締組織和脂肪組織,，種子材料應(yīng)先去殼甚至去種皮以免手單寧等物質(zhì)的污染,，油料種子建議先用低沸點(diǎn)的有機(jī)溶劑。然后根據(jù)不同的情況,，選擇適當(dāng)?shù)姆椒?，將組織和細(xì)胞破碎。
動(dòng)物組織和細(xì)胞可用電動(dòng)搗碎機(jī)或勻漿機(jī)破碎或用超聲波處理破碎,。植物組織和細(xì)胞由于具有纖維素,、半纖維素和果膠等物質(zhì)組成的細(xì)胞壁，一般需要用石英砂或玻璃粉和適當(dāng)?shù)奶崛∫阂黄鹧心サ姆椒ɑ蛴美w維素酶處理也能達(dá)到目的,。細(xì)菌細(xì)胞的破碎比較麻煩,，因?yàn)檎麄€(gè)細(xì)菌細(xì)胞壁的骨架實(shí)際上是一個(gè)借共價(jià)鍵連接而成的肽聚糖囊狀大分子，非常堅(jiān)韌,。
破碎細(xì)菌細(xì)胞壁的常用方法有超聲波破碎,，與砂研磨、高壓擠壓或溶菌酶處理等。組織和細(xì)胞破碎后,，選擇適當(dāng)?shù)木彌_液把所要的蛋白提取出來(lái),。細(xì)胞碎片等不溶物用離心或過(guò)濾的方法除去。
如果所要的蛋白主要集中在某一細(xì)胞組分,，如細(xì)胞核,、染色體、核糖體或可溶性細(xì)胞質(zhì)等,，則可利用差速離心的方法將它們分開(kāi),，收集該細(xì)胞組分作為下步純化的材料。如果碰上所要蛋白是與細(xì)胞膜或膜質(zhì)細(xì)胞器結(jié)合的,，則必須利用超聲波或去污劑使膜結(jié)構(gòu)解聚,，然后用適當(dāng)介質(zhì)提取。
2. 粗分級(jí)分離：當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)提取液(有時(shí)還雜有核酸,、多糖之類)獲得后,，選用一套適當(dāng)?shù)姆椒ǎ瑢⑺牡鞍着c其他雜蛋白分離開(kāi)來(lái),。一般這一步的分離用鹽析,、等電點(diǎn)沉淀和有機(jī)溶劑分級(jí)分離等方法。這些方法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便,、處理量大,，既能除去大量雜質(zhì)，又能濃縮蛋白溶液,。有些蛋白提取液體積較大,，又不適于用沉淀或鹽析法濃縮，則可采用超過(guò)濾,、凝膠過(guò)濾,、冷凍真空干燥或其他方法進(jìn)行濃縮。
3.細(xì)分級(jí)分離：樣品經(jīng)粗分級(jí)分離以后,，一般體積較小,，雜蛋白大部分已被除去。進(jìn)一步純化,，一般使用層析法包括凝膠過(guò)濾,、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等,。必要時(shí)還可選擇電泳法,，包括區(qū)帶電泳、等電點(diǎn)聚焦等作為*后的純化步驟,。用于細(xì)分級(jí)分離的方法一般規(guī)模較小,，但分辨率很高,。
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