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1、常見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)污染及防治

常見(jiàn)污染有細(xì)菌污染,、霉菌污染,、支原體污染,、真菌污染、原蟲(chóng)污染等,。

2,、細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中污染的來(lái)源主要有以下幾條途徑：

• 不潔的動(dòng)物組織標(biāo)本，很多動(dòng)物組織本該是無(wú)菌的,，但由于取材時(shí)不小心也會(huì)有污染的機(jī)會(huì),。另外有的組織本身含有細(xì)菌，如

取材時(shí)不用濃的抗生素洗液洗滌浸泡,，也會(huì)帶菌,，造成細(xì)胞污染。

• 空氣中含有大量的微生物,，如果操作室與外界隔離不嚴(yán)或消毒不充分,，很容易造成污染。另外,，凈化工作臺(tái)使用過(guò)久,，濾板未定期更換或長(zhǎng)久不更換，外界氣流過(guò)強(qiáng),，污染空氣進(jìn)入操作區(qū),，也會(huì)導(dǎo)致污染。春夏季南方地區(qū)多雨,，空氣濕度大,，含菌量多，工作不注意也易造成污染,。

• 清洗消毒培養(yǎng)用物品,、材料洗刷不凈，培養(yǎng)用液和器材滅菌不*也會(huì)引入微生物和有毒物質(zhì),。

• 操作來(lái)自操作者的污染主要有以下幾方面：

- 器材和溶液使用前未仔細(xì)檢查是否污染過(guò),，或者是否已經(jīng)消毒滅菌處理過(guò)，或者雖經(jīng)處理,，時(shí)隔已久又末重新處理,。

- 操作者未戴帽子，呼出氣中含有細(xì)菌和支原體,。

- 培養(yǎng)瓶口未用酒精擦和燒灼,。

- 操作者不當(dāng)心，動(dòng)作不正確而將吸管或無(wú)菌器具碰到了污染的物品,，如手上皮膚和瓶子外壁等,。

- 操作者操作時(shí)大聲說(shuō)話，來(lái)回走動(dòng)揚(yáng)起灰塵等

- 細(xì)胞傾液時(shí)倒出培養(yǎng)瓶或者滴落在超凈臺(tái)上，未及時(shí)擦凈或者灼燒,。

- 移液管吸取液體時(shí)將空氣中的氣流吸入培養(yǎng)瓶中,。

- 長(zhǎng)時(shí)間的將離心管放在離心機(jī)中，可能由于口沒(méi)有*封閉而造成污染,。

- 同一移液管交叉污染多瓶細(xì)胞。

- 血清,，非正規(guī)來(lái)源,，潛在病毒和支原體污染

1.細(xì)菌：

細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，不同的細(xì)菌類型,，可有不同的外形,，培養(yǎng)液一般會(huì)快速渾濁變黃，有時(shí)候有異味,，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯,。

預(yù)防及補(bǔ)救措施：

• 使用LabServ系列耗材，已無(wú)菌無(wú)熱源處理,。

• 可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理,，例如雙抗青霉素，鏈霉素,?；蛘咚沫h(huán)素，慶大霉素,。

• 嚴(yán)格無(wú)菌操作

2. 霉菌：

培養(yǎng)液是清亮的,，倒置顯微鏡下無(wú)雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天,，仍清亮,，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見(jiàn)呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物,，可看到明顯的菌絲,，細(xì)胞仍可生長(zhǎng)，但時(shí)間長(zhǎng)之后,，細(xì)胞的活力狀態(tài)變差,。

解決方法：

• 用硫酸銅溶液擦拭培養(yǎng)箱，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅,?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。

• 被霉菌污染后,，可把所有細(xì)胞暫時(shí)轉(zhuǎn)移,，采用過(guò)氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過(guò)氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個(gè)小時(shí),，使其蒸汽彌漫,。待過(guò)氧乙酸的氣味消散后，再移入細(xì)胞,。預(yù)防霉菌污染,，可在培養(yǎng)基里加3u/mL的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素D或雙抗。

3. 支原體：

黑色的,，好象多為多形,光學(xué)顯微鏡很難觀察到,，國(guó)內(nèi)血清很多都沒(méi)有做支原體陰性檢測(cè)，而支原體是牛血清中比較常見(jiàn)的微生物之一,。而且它不能用過(guò)濾的辦法除去,。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯,，只是慢慢si去,。

解決方法：

• 支原體污染細(xì)胞后，特別是重要的細(xì)胞株,，有必要清除支原體,，常用方法有：抗生素處理、抗血清處理,、抗生素加抗血清和補(bǔ)體聯(lián)合處理,。要注意的是：支原體沒(méi)有細(xì)胞壁，故作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素,，如內(nèi)酰胺類,、萬(wàn)古霉素等是不敏感的；對(duì)多粘菌素,、利福平,、磺胺藥物普遍耐藥。對(duì)支原體有抑制活性抗生素是四環(huán)素類,、大環(huán)內(nèi)酯類等,，氨基糖苷類、氯霉素對(duì)支原體有較小的抑制作用,。必要時(shí)更換所有培養(yǎng)用物,。通常，濾過(guò)除菌的方法對(duì)支原體是沒(méi)有作用的,。

4. 真菌：

一般培養(yǎng)液清亮,，不變色，鏡下有絲狀物,，有些真菌開(kāi)始很像死細(xì)胞碎片,，只是它很多很多的小塊很清楚,，象珊瑚狀，不象細(xì)胞碎片分不清,，慢慢的會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物,。真菌生長(zhǎng)的比較慢，不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn),，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了,，也很難救活了。

解決方法：

• 果斷扔掉,，然后*消毒滅菌培養(yǎng)間,，CO2培養(yǎng)箱，器皿和培養(yǎng)液,。