一,、產(chǎn)品概述
黃曲霉毒素是一類真菌(如黃曲霉和寄生曲霉)的有毒的代謝產(chǎn)物,它們具有很強(qiáng)的致癌性,主要存在于谷物,、堅(jiān)果、棉籽以及一些和人類血液,,動(dòng)物飼料相關(guān)的產(chǎn)品中,。黃曲霉毒素M1是黃曲霉毒素B1的羥基化代謝產(chǎn)物,,也是一種強(qiáng)致癌物質(zhì)。牛乳及其制品是易受到黃曲霉毒素M1污染的食品之一,。Aflatoxin M1的檢測(cè)方法有高效液相色譜法(HPLC),,薄層層析法(TLC)等。而使用黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒則能夠快速而準(zhǔn)確的分析樣品中黃曲霉毒素M1殘留,。
二,、適用范圍
黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒可定性、定量檢測(cè)牛奶,,奶粉等樣本中的黃曲霉毒素M1,。
三、試驗(yàn)原理
黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA,,在微孔板上預(yù)包被黃曲霉毒素M1抗原,,加入樣本(或黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品溶液)及辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素M1抗體。樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的黃曲霉毒素M1與預(yù)包被在板孔上的黃曲霉毒素M1抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素M1抗體,。與樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的黃曲霉毒素M1結(jié)合的酶標(biāo)抗體在洗滌時(shí)被除去,。再加入TMB顯色液,讀取吸光值,。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素M1抗原的含量成負(fù)相關(guān),。對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可得出相應(yīng)殘留物黃曲霉毒素M1的含量,。
四,、注意事項(xiàng)
1. 室溫低于20℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(20~25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2. 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作,。
3. 每加一種試劑前需將其搖勻,。
4. 反應(yīng)終止液為2M鹽酸,避免接觸皮膚,。
5. 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒,;也不要使用過(guò)了有效期的試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過(guò)了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低,;不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑,。
6. 儲(chǔ)存條件:
保存試劑盒于2~8℃,不要冷凍,,將不用的酶標(biāo)板微孔板放進(jìn)自封袋重新密封,。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下,。
7. 試劑變質(zhì)的跡象:
發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì),,應(yīng)當(dāng)棄之,。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時(shí),表示試劑可能變質(zhì),。
8. 在加入底物液液后,,一般顯色時(shí)間為20~30min即可。若顏色較淺,,可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到35min(或更長(zhǎng)),,但不得超過(guò)40min。反之,,則減短反應(yīng)時(shí)間,。
9. 該試劑盒適宜的反應(yīng)溫度為25℃,溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化,。