1.技術(shù)背景

  米酵菌酸（Bongkrekic acid,，BA）是由椰毒假單胞菌屬酵米面亞種產(chǎn)生的一種可以引起食物中毒的呼吸系統(tǒng)性毒素。其結(jié)構(gòu)如下圖所示,，它是一種脂溶性酸性化合物,，主要產(chǎn)生于谷類發(fā)酵制品、變質(zhì)椰子食品及鮮銀耳類產(chǎn)品中,，攝入受其污染的食物會引發(fā)中毒,，嚴(yán)重可致死亡。

目前市面上常用方法以及國標(biāo)規(guī)定方法為固相萃取柱凈化和液液萃取的凈化方法,，可能會面臨操作復(fù)雜,、有機(jī)試劑消耗大、干擾多,、回收率低等問題,，Pribolab技術(shù)研發(fā)中心基于現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)方法的不足和局限性，建立了多功能凈化柱“一步法”凈化,，可用于液相色譜二極管陣列檢測器或液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測食品中的米酵菌酸殘留,，具有前處理簡單快速、環(huán)保低有機(jī)試劑消耗,、回收率高,，凈化效果好的特點，適用于各類食品基質(zhì)中米酵菌酸的測定,。

2.實驗方法

參考食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)-食品中米酵菌酸的測定（GB 5009.189-2016）,，優(yōu)化前處理方法,，使其適用于“一步法”快速高效凈化。

2.1實驗試劑耗材

Pribolab® 500μg/mL米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（乙腈）

Pribolab®·ODS·C18 液相色譜柱

PriboFast® MFC 335多功能凈化柱

PriboFast玻璃纖維濾紙

乙腈水提取液：量取84 mL乙腈用水定容至100 mL,，混勻備用,。

2.2樣品制備與提取

干試樣經(jīng)粉碎過篩，濕試樣經(jīng)充分均質(zhì),，稱取25.0g試樣置于錐形瓶中,，加入100mL乙腈水提取液，混勻,，超聲提取30min,，5000 r/min離心5分鐘或用玻璃纖維濾紙過濾，待凈化,。

2.3試樣的凈化

取8mL上清液加入透明玻璃管中,，使液體通過PriboFast® 335多功能凈化柱完成凈化。取凈化后的溶液過濾膜后上液相或液質(zhì)分析,。

3.液相液質(zhì)條件

4.實驗結(jié)果

4.1實驗譜圖

圖1 米酵菌酸液相色譜圖

          圖2米酵菌酸液質(zhì)TIC圖

4.2結(jié)果分析

米酵菌酸結(jié)構(gòu)式含有3個羧基（-COOH），酸性較強(qiáng),，容易丟失質(zhì)子而帶上負(fù)電荷,，其保留因子和選擇性受pH值影響大，當(dāng)流動相條件為酸性時可避免離子化從而得到對稱色譜峰,。因此液相色譜采用甲醇+1%乙酸水（80:20）為流動相,，分離效果好，方法檢出限為0.2μg/g,。在液質(zhì)檢測中0.1%甲酸水-乙腈為流動相,，同樣酸性環(huán)境抑制了米酵菌酸的電離，使其以分子形式存在,，在反向固定相中的保留增強(qiáng),，且減少了與固定相中殘存硅醇基的結(jié)合，有助于改善峰型,，方法檢出限0.1μg/kg,。

 本次實驗選取了常被米酵菌酸污染的食品酸湯子、米粉,、銀耳進(jìn)行加標(biāo)實驗驗證,，加標(biāo)水平2 mg/kg,每種加標(biāo)做6個平行,。結(jié)果如下表所示,。

5.結(jié)論

本實驗建立多功能凈化柱“一步法”凈化食品中的米酵菌酸，具有前處理簡單高效,，回收率高的特點,，適用于液相以及液質(zhì)方法檢測米酵菌酸殘留,，對食品風(fēng)險監(jiān)測和相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的制定具有指導(dǎo)意義。

實驗耗材采購指南