本法系用液相色譜法（通則0512）測(cè)定藥材,、飲片及制劑中的黃曲霉毒素（以黃曲霉毒素B1,、黃曲霉毒素B2,、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2總量計(jì)）,，除另有規(guī)定外,，按下列方法測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑

流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水（40:18:42）

光化學(xué)柱后衍生器（254nm. PriboFast-KRC光化學(xué)柱后衍生器.Pribolab-MDU光化學(xué)柱后衍生器）

熒光檢測(cè)器檢測(cè),，激發(fā)波長(zhǎng)：360nm(365nm)   發(fā)射波長(zhǎng)：450nm

兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5,。

混合對(duì)照品溶液的制備

精密量取PriboFast®STD#1082AFT黃曲霉毒素混合對(duì)照品溶液（黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2,、黃曲霉毒素G1,、黃曲霉毒素G2標(biāo)示濃度分別為1.0µg/mL、 0.3µg/ mL,、1.0µg/ mL,、0.3µg/ mL）0.5 mL,置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度,，作為儲(chǔ)備溶液,。精密量取儲(chǔ)備溶液1 mL，置25 mL量瓶中,，用甲醇稀釋至刻度,，即得。

供試品溶液的制備

1.取供試品粉末約15g(過二號(hào)篩),，精密稱定,，加入氯化鈉3g,，置于均質(zhì)瓶中,，精密加入70%甲醇溶液75mL，高速攪拌2分鐘（攪拌速度大于11,000轉(zhuǎn)/分,普瑞邦均質(zhì)器Pribolab® WR800: 轉(zhuǎn)速22,000 r/min）,。

2.2500r/min離心5分鐘或用槽紋濾紙過濾,。

3.精密量取上清液15mL，置50mL量瓶中,，用PBS溶液稀釋至刻度,，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm,用PriboFast®玻璃微纖維濾紙代替更好,，性能較高,，效率高）過濾。

4.準(zhǔn)確移取20.0mL樣品提取液,，過PriboFast® 免疫親和柱,，過柱時(shí)流速不能快，流速快的話回收效率差,，建議采取重力過柱,。

5.用PBS溶液20mL洗滌,，洗滌液棄去。

6.為保證洗脫充分,，建議以2.0mL色譜甲醇分三步進(jìn)行洗脫,，重力洗脫即可。首先,，加入1.0mL甲醇洗脫,，當(dāng)溶劑通過柱子后，孵育30s（孵育即甲醇在柱子中浸泡）,；然后,，再加入0.5mL甲醇進(jìn)行洗脫，過柱前孵育30s,；后,，再加入0.5mL甲醇洗脫，過柱前孵育30s,，并使2-3mL空氣通過柱體,，收集洗脫液，置2mL量瓶中,，并用甲醇稀釋至刻度,，搖勻，即得,。 (免疫親和柱操作建議使用PriboFast®泵流操作架,便于控制各個(gè)步驟流速,保證較好的回收率)

液相色譜條件（光化學(xué)柱后衍生法）

流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水（40:18:42）

柱  溫：30 ℃

進(jìn)樣量：20 μL

激發(fā)波長(zhǎng)：360 nm,；發(fā)射波長(zhǎng)：450 nm

用PriboFast®KRC光化學(xué)柱后衍生器(254nm)

流速：  0.8 mL/min    

保留時(shí)間:G2: 10 min, G1:12 min, B2:14 min, B1:18min（大約)

用PriboFast®MDU光化學(xué)柱后衍生器(254nm)

流速：    1.2 mL/min    

保留時(shí)間：G2: 3 min, G1:5 min, B2:6 min, B1:9 min（大約)

測(cè)定法： 分別精密吸取上述混合對(duì)照品溶液5μL、10μL,、15μL,、20μL、25μL,，注入液相色譜儀,，測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo),，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。另精密吸取上述供試品溶液20～25μL,，注入液相色譜儀,，測(cè)定峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品中相當(dāng)于黃曲霉毒素B1,、B2,、G1、G2的量,，計(jì)算,，即得,。

【附注】

（1）本實(shí)驗(yàn)應(yīng)有相應(yīng)的安全、防護(hù)措施,，并不得污染環(huán)境,。

（2）殘留有黃曲霉毒素的廢液或廢渣的玻璃器皿，應(yīng)置于貯存容器（裝有10%次氯酸鈉溶液）內(nèi),，浸泡24小時(shí)以上,，再用清水將玻璃器皿沖洗干凈。