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上海分光光度計的設計原理和工作原理
上海分光光度計的設計原理和工作原理
上海分光光度計就是利用分光光度法對物質(zhì)進行定量定性分析的儀器,。而分光光度法則是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,,對該物質(zhì)進行定性和定量分析,。隨著光度計行業(yè)的不斷發(fā)展,越來越多的企業(yè)和行業(yè)運用到了光度計,,也有大量的企業(yè)進入了光度計并發(fā)展,。
物質(zhì)對光的選擇性吸收波長,,以及相應的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后,可用同樣條件將該供試品配成溶液,,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量,。在可見光區(qū),除某些物質(zhì)對光有吸收外,,很多物質(zhì)本身并沒有吸收,但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多,,且常使用單色光純度較差的儀器,,故測定時應用標準品或?qū)φ掌吠瑫r操作。
分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器,。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量,。儀器主要由光源,、單色器,、樣品室、檢測器,、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成,。
事實上,,上海分光光度計的設計原理和工作原理,允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化,,即儀器有一定的準確度和度,。如Eppendorf Biophotometer的準確度≤1.0%(1A),。這樣多次測試的結果在均值1.0%左右之間變動,,都是正常的。另外,,還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值,離子濃度等:在測試時,,離子濃度太高,,也會導致讀數(shù)漂移,,因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液,,如TE,,可大大穩(wěn)定讀數(shù),。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素:由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒,尤其是核酸樣品,。這些小顆粒的存在干擾測試效果,。為了zui大程度減少顆粒對測試結果的影響,,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值在0.1-1.,。在此范圍內(nèi),,顆粒的干擾相對較小,,結果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過低,,或者過高(超過光度計的測試范圍),。后是操作因素,如混合要充分,,否則吸光值太低,甚至出現(xiàn)負值;混合液不能存在氣泡,,空白液無懸浮物,,否則讀數(shù)漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,,否則濃度差異太大;換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致,。
上海分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源,通過系列分光裝置,,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光源透過測試的樣品后,,部分光源被吸收,,計算樣品的吸光值,,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比,。