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液相色譜儀進(jìn)樣方式
液相色譜儀進(jìn)樣方式 |
液相色譜儀的進(jìn)樣裝置要求密封性好,,死體積小,,重復(fù)性好,保證中心進(jìn)樣,,進(jìn)樣時對色譜系統(tǒng)的壓力和流量影響小。HPLC進(jìn)樣方式有隔膜進(jìn)樣,、停流進(jìn)樣,、閥進(jìn)樣和自動進(jìn)樣器進(jìn)樣等。 一,、隔膜進(jìn)樣: 用微量注射器將樣品注入專門設(shè)計的與HPLC色譜柱相連的進(jìn)樣頭內(nèi),,可把樣品直接送到色譜柱填充床的中心,死體積幾乎等于零,,可獲得*柱效,,且價格便宜,操作方便,。但不能在高壓下使用(如10MPa以上),;隔膜容易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應(yīng),使進(jìn)樣重復(fù)性只能達(dá)到1%~2%,;能耐各種溶劑的橡皮不易找到,常規(guī)分析使用受到限制,。 二,、停流進(jìn)樣: 可避免在高壓下進(jìn)樣。但在HPLC中由于隔膜的污染,,停泵或重新啟動時往往會出現(xiàn)鬼峰,;保留時間不準(zhǔn)。在以峰的始末信號控制餾分收集的制備色譜中,,效果較好,。 三、閥進(jìn)樣: HPLC分析常用六通閥,,其關(guān)鍵部件由圓形密封墊(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成,。由于閥接頭和連接管死體積的存在,柱效低于隔膜進(jìn)樣(約下降5%~10%),,但耐高壓(35~40MPa),,進(jìn)樣量準(zhǔn)確,重復(fù)性好(0.5%),,操作方便,。 1、六通閥進(jìn)樣方式: (1)部分裝液法進(jìn)樣: 進(jìn)樣時,,進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%(zui多75%),,要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同,。 此法進(jìn)樣的準(zhǔn)確度和重復(fù)性決定于注射器取樣的熟練程度,,而且易產(chǎn)生由進(jìn)樣引起的峰展寬,。 (2)*裝液法進(jìn)樣: 進(jìn)樣時,進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的5~10 倍(zui少3倍),,這樣才能*置換定量環(huán)內(nèi)的流動相,,消除管壁效應(yīng),確保進(jìn)樣的準(zhǔn)確度和重復(fù)性,。 2,、六通閥使用和維護(hù)注意事項: (1)樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過濾,以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損,。 (2)轉(zhuǎn)動閥芯時不能太慢,,更不能停留在中間位置。否則流動相受阻,,使泵內(nèi)壓力劇增,,甚至超過泵的zui大壓力,再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時,,過高的壓力將使色譜柱損壞,。 (3)為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中,每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥,。通??捎盟疀_洗,或先用能溶解樣品的溶劑沖洗,,再用水沖洗,。 四、自動進(jìn)樣器進(jìn)樣: 用于大量樣品的常規(guī)分析,。 |