畜禽中土霉素,、四環(huán)素,、金霉素含量的測定

一.儀器

  液相色譜儀,，紫外檢測器,。

二.試劑

  土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.0100g（±0.0001g）土霉素，用0.1mol/L鹽酸溶液溶解,，并定容至10.0mL ,，即每毫升含土霉素1.0mg。

  四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.0100g四環(huán)素,，用0.1mol/L鹽酸溶液溶解并定容至10.0mL ,，即此溶液每毫升含四環(huán)素1.0mg。

  金霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.0100g金霉素,，用蒸餾水溶解并定容至10.0mL ，即此溶液每毫升含金霉素1.0mg,。  

  混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：取土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液、四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.0mL,，取金霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0mL置于10.0mL容量瓶中,，加蒸餾水至刻度,。此溶液每毫升含土霉素,、四霉素各0.1mg,、金霉素0.2mg,，臨用時現(xiàn)配。

三.實驗步驟

  1.樣品處理

  稱取5.00g(±0.01g)切碎的肉樣（＜5mm）,，置于50mL的錐形燒瓶中,，加入5%高氯酸25.0mL于振蕩器上振蕩提取10min，移入離心管中,，以2000r/min離心3min，取上清液經(jīng)4.5μm濾膜過濾,，以此液進行HPLC分析。

  2.液相分析參考條件  

  ① 色譜柱：ODS--C₁₈₍5_μm),，6.2mm×15cm,。

  ② 流動相：乙腈+0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液[用30%(體積分數(shù))硝酸溶液調(diào)節(jié)pH至2.5][35:65(體積比)],。

  ③ 流速：1mL/min。

  ④ 檢測波長：355nm,。

  ⑤ 進樣量：10μL。

  3.樣品測定  

  吸取四,、1.處理好的溶液10 μL,，注入液相色譜儀，進行HPLC分析,，記錄峰高，從工作曲線上查的含量,。

  4.工作曲線的制備

  稱取7分切碎的肉樣，每份5.00g,，分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0μL，25μL,，50μL，100μL,，150μL,，200μL，250μL,，（）（）（含土霉素、四環(huán)素各為0.0μg,，2.5μg，5.0μg,，10.0μg，15.0μg,，20μg，25μg,，含金霉素0.0μg，5.0μg,，10.0μg,，20.0μg，30.0μg,，40.0μg，50.0μg）,，與樣品同樣操作。以峰高為縱坐標(biāo),，以抗生素含量為橫坐標(biāo),，繪制工作曲線