HPLC具有高分辨率,、高靈敏度,、速度快、色譜柱可反復(fù)利用,流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué),、食品分析,、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析,、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域,。
液相色譜在使用過程中的四大關(guān)鍵因素
01、液相色譜儀本身:
對于儀器本身一般不會(huì)有問題,,特別是剛買回來的新儀器,。對于儀器本身最重要的就是儀器的校驗(yàn),剛買回來的儀器一般都是由賣家先對儀器做系統(tǒng)的確認(rèn)工作(包括IQ、PQ,、OQ),,確認(rèn)順利通過后,再請國家或省級儀器檢定局的來校驗(yàn),,檢定合格后就可以放心用了,,除此之外,,一些做得好的公司每半年會(huì)對儀器進(jìn)行一次的內(nèi)部校驗(yàn),,目的就是為了保證儀器的正常可運(yùn)行狀態(tài),。
02,、色譜條件:
色譜條件一般包括流動(dòng)相、色譜柱,、檢測波長,、流速及進(jìn)樣量。流動(dòng)相就涉及到配制流動(dòng)相所用到的水和試劑試液,,水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大于18.2兆歐級別,,試劑試液要求用色譜級別的,原因?yàn)榉乐顾驮噭┰囈褐械碾s質(zhì)對色譜結(jié)果的干擾,。
色譜柱會(huì)因不同的品種而有不同的要求,,但每根色譜柱都有它的清洗要求,這個(gè)在色譜柱說明書上都可以找到,,一定要根據(jù)上面的要求進(jìn)行,,否則會(huì)造成色譜柱效下降和色譜柱的使用壽命縮短,檢測波長也會(huì)因品種的不同有不同的要求,,這里需要指出的是要注意觀察檢測器氘燈能量的變化,,比如基線波動(dòng)大,活性成分的響應(yīng)值突然變小等,,都有可能是氘燈的能量不足所引起的,,氘燈一般建議使用800小時(shí),但實(shí)際上使用時(shí)間不止,,可根據(jù)實(shí)際情況更換,。
流速也因品種的不同而不同,一般為1.0ml/min,,流速是不可隨意改動(dòng)的,,特別是作為QC人員,但是作為研發(fā)人員,,有時(shí)為了摸索條件或進(jìn)行方法耐用性驗(yàn)證,,會(huì)對流速進(jìn)行改變以評價(jià)方法的適用性。對于進(jìn)樣量因不同的品種也有不同規(guī)定,,進(jìn)樣量這塊現(xiàn)在都使用自動(dòng)進(jìn)樣,,所以進(jìn)樣精密度都很好,,不需強(qiáng)調(diào)什么
03、操作人員:
首先,,作為液相操作人員,,一定要認(rèn)真學(xué)習(xí)液相的說明書,掌握液相硬件和軟件的操作,,掌握日常的維護(hù)保養(yǎng),,掌握最基礎(chǔ)故障的排除和維修。一般液相的操作規(guī)程也是有操作人員起草的,,所以只要嚴(yán)格按照操作要求進(jìn)行操作,,一般不會(huì)出現(xiàn)問題,當(dāng)然這里需要特別指出的是對于液相的日常維護(hù)保養(yǎng)很重要,,比如流動(dòng)相的過濾,、脫氣、泵密封墊的清洗,、系統(tǒng)管路的清洗,、溶劑過濾頭的清洗等,倘若不堅(jiān)持,,很容易導(dǎo)致色譜柱堵塞,、系統(tǒng)壓力過大、色譜峰異常等不必要的故障,,浪費(fèi)時(shí)間,。其次,操作人員在配制液相分析用樣品溶液時(shí),,最好由同一個(gè)人單獨(dú)完成,,以免不必要的偶然誤差。
04,、液相安裝環(huán)境:
液相色譜儀應(yīng)盡量安裝于水平,、遠(yuǎn)離振動(dòng)、電磁干擾的屋內(nèi)的臺面上,,有條件的話盡量將液相數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分隔開,,一個(gè)是防止色譜基線噪音偏大,基線不穩(wěn)等,,一個(gè)是為減少對人體的危害,。