HPLC常見(jiàn)問(wèn)題的解答

　　一,、問(wèn):用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移,，有時(shí)發(fā)生快速變化,，原因何在,？如何解決？

　　答:關(guān)于漂移問(wèn)題：

　　1． 溫度控制不好,，解決方法是采用恒溫裝置,，保持柱溫恒定

　　2． 流動(dòng)相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā),、反應(yīng)等

　　3． 柱子未平衡好,，需對(duì)柱子進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的平衡

　　關(guān)于快速變化問(wèn)題

　　1． 流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速,，使之保持穩(wěn)定

　　2． 泵中有氣泡,，可通過(guò)排氣等操作將氣泡趕出。

　　3． 流動(dòng)相不合適,，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合

　　二,、問(wèn):液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？</B>

　　答: 1． 篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子,，替換篩板或更換柱子,。

　　2． 存在干擾峰，解決辦法為使用較長(zhǎng)的柱子,，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子

　　三,、問(wèn)：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法</B>

　　答: 1． 樣品量不足，解決辦法為增加樣品量

　　2． 樣品未從柱子中流出,。可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子

　　3． 樣品與檢測(cè)器不匹配,。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器

　　4． 檢測(cè)器衰減太多,。調(diào)整衰減即可。

　　5． 檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大,。解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)

　　6． 檢測(cè)器池窗污染,。解決辦法為清洗池窗。

　　7． 檢測(cè)池中有氣泡,。解決辦法為排氣,。

　　8． 記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可,。

　　9． 流動(dòng)相流量不合適,。調(diào)整流速即可。

　　10． 檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線(xiàn),。解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器,，重作校正曲線(xiàn)。

　　四,、問(wèn)：做HPLC分析時(shí),，柱壓不穩(wěn)定，原因何在,？如何解決,？</B>

　　答：原因可能有：

　　1． 泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣,，對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理,；

　　2． 比例閥失效，更換比例閥即可,；

　　3． 泵密封墊損壞,，更換密封墊即可；

　　4． 溶劑中的氣泡,，解決的辦法是對(duì)溶劑脫氣,，必要時(shí)改變脫氣方法；

　　5． 系統(tǒng)檢漏,，找出漏點(diǎn),，密封即可,；

　　6． 梯度洗脫，這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的,。

　　五,、問(wèn)：我購(gòu)買(mǎi)的HPLC柱驗(yàn)收測(cè)試時(shí)柱壓過(guò)高，請(qǐng)問(wèn)為什么,？</B>

　　答：柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶(hù)常碰到的問(wèn)題,。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問(wèn)題,，您可按下面步驟檢查問(wèn)題的起因,。

　　1． 拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高,，否則是保護(hù)柱的問(wèn)題,，若柱壓仍高，再檢查,；

　　2． 把色譜柱從儀器上取下,，看壓力是否下降，否則是管路堵塞,，需清洗,，若壓力下降，再檢查,；

　　3． 將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上,，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，（此時(shí)不要連接檢測(cè)器,，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池）,。這時(shí)，如果柱壓仍不下降,，再檢查,；

　　4． 更換柱子入口篩板，若柱壓下降,，說(shuō)明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì),，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高,，請(qǐng)與廠商聯(lián)系,。 一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線(xiàn)過(guò)濾器便可避免柱壓過(guò)高的問(wèn)題