HPLC常見問題的解答

　　一、問:用HPLC進(jìn)行分析時保留時間有時發(fā)生漂移,，有時發(fā)生快速變化,，原因何在？如何解決,？

　　答:關(guān)于漂移問題：

　　1． 溫度控制不好,，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定

　　2． 流動相發(fā)生變化,，解決辦法是防止流動相發(fā)生蒸發(fā),、反應(yīng)等

　　3． 柱子未平衡好,，需對柱子進(jìn)行更長時間的平衡

　　關(guān)于快速變化問題

　　1． 流速發(fā)生變化,，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定

　　2． 泵中有氣泡,，可通過排氣等操作將氣泡趕出,。

　　3． 流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合

　　二,、問:液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么,？</B>

　　答: 1． 篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子,，替換篩板或更換柱子,。

　　2． 存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子

　　三,、問：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法</B>

　　答: 1． 樣品量不足,，解決辦法為增加樣品量

　　2． 樣品未從柱子中流出?？筛鶕?jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動相或柱子

　　3． 樣品與檢測器不匹配,。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器

　　4． 檢測器衰減太多。調(diào)整衰減即可,。

　　5． 檢測器時間常數(shù)太大,。解決辦法為降低時間參數(shù)

　　6． 檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗,。

　　7． 檢測池中有氣泡,。解決辦法為排氣。

　　8． 記錄儀測壓范圍不當(dāng),。調(diào)整電壓范圍即可,。

　　9． 流動相流量不合適。調(diào)整流速即可,。

　　10． 檢測器與記錄儀超出校正曲線,。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線,。

　　四,、問：做HPLC分析時，柱壓不穩(wěn)定,，原因何在,？如何解決？</B>

　　答：原因可能有：

　　1． 泵內(nèi)有空氣,，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣,，對溶劑進(jìn)行脫氣處理；

　　2． 比例閥失效,，更換比例閥即可,；

　　3． 泵密封墊損壞，更換密封墊即可,；

　　4． 溶劑中的氣泡,，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法,；

　　5． 系統(tǒng)檢漏,，找出漏點(diǎn)，密封即可,；

　　6． 梯度洗脫,，這時壓力波動是正常的,。

　　五、問：我購買的HPLC柱驗(yàn)收測試時柱壓過高,，請問為什么,？</B>

　　答：柱壓過高是HPLC柱用戶常碰到的問題。其原因有多方面,，而且常常并不是柱子本身的問題,，您可按下面步驟檢查問題的起因。

　　1． 拆去保護(hù)預(yù)柱,，看柱壓是否還高,，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高,，再檢查,；

　　2． 把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降,，否則是管路堵塞,，需清洗，若壓力下降,，再檢查,；

　　3． 將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子,，（此時不要連接檢測器,，以防固體顆粒進(jìn)入流動池）。這時,，如果柱壓仍不下降,，再檢查；

　　4． 更換柱子入口篩板,，若柱壓下降,，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升,。若柱壓還高,，請與廠商聯(lián)系。 一般情況下,，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題