一.儀器

  液相色譜儀,，紫外檢測器,；離心機(jī)_；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,；K-D濃縮器,。

二.試劑

  激素標(biāo)準(zhǔn)貯備液：分別稱取雌三醇、雌二醇,、雌酮,、睪酮、孕酮0.1000g,，用甲醇溶解并定容至100mL,，每毫升含各種激素均為1.000mg。

  激素標(biāo)準(zhǔn)使用液：精密吸取一定量的激素標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)貯備液，用甲醇配制成每毫升含各種激素為10.00μg,、an眠酮2.00μg和每毫升含各種激素2.00μg,、an眠酮2.00μg的兩種標(biāo)準(zhǔn)使用液。

三.實(shí)驗(yàn)步驟

  1.樣品的處理

  取可食部分,，搗成均漿,，稱取50g左右置250mL具塞三角瓶中。在上述樣品中加入an眠酮20.00μg/mL的內(nèi)標(biāo)貯備液1.0mL,，加甲醇+丙酮（1+1）混合溶液150mL,，在振蕩器上振搖提取30min。用快速濾紙過濾,，殘?jiān)蒙倭考状?丙酮（1+1）混合液洗滌數(shù)次,，洗液并入濾液中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或K-D濃縮器中將溶劑蒸除,。殘?jiān)眉状?0mL溶解,，經(jīng)盛有無水硫酸鈉的漏斗濾入250mL分液漏斗中，再用10mL甲醇分?jǐn)?shù)次洗滌漏斗及內(nèi)容物,，洗液并入濾液中,，加pH=5.2的醋酸鈉緩沖液80mL左右，混勻后二氯甲烷50mL,、30mL,、30mL振搖提取3次。合并提取液并用無水硫酸鈉脫水,，在水浴上揮干溶劑,，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?0.0mL，混勻后,，以3000r/min速度離心5min,，取上清液供色譜分析用。

  2.液相色譜參考條件 

  ① 色譜柱：HP-ODS 4.6mm×200mm,。

  ② 流動相：乙腈+甲醇+四氫呋喃+0.01mol/L 醋酸鈉溶液（20+20+10+50）,。

  ③ 流速：1.0mL/min。

  ④ 測定波長：270nm,。

  ⑤ 進(jìn)樣體積：10μL,。

  3.樣品測定

  取供色譜測定的樣品溶液10μL，注入液相色譜儀,，以內(nèi)標(biāo)法定量,。