小鼠胚胎成纖維細胞用于支持鼠和人多功能干細胞的生長,。該細胞不僅能提供多能性干細胞生長的物質(zhì),,也能分泌維持干細胞多能性的關(guān)鍵生長因子,。該細胞從大鼠胚胎中分離,,并在早期起作用,。作為飼養(yǎng)層細胞,必須通過輻射阻止該細胞的增殖,。經(jīng)處理的細胞也能用于產(chǎn)生有用的培養(yǎng)基,,用于自由飼養(yǎng)的多能性干細胞的培養(yǎng),。
小鼠胚胎成纖維細胞培養(yǎng)方法:
傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除,PBS清洗兩遍后,,加入6mL(/100mm皿)胰酶,,在顯微鏡下觀察,,期間禁止搖晃培養(yǎng)皿,細胞剛有脫落時,,則吸除大部分胰酶,,留約0.5mL,,移至培養(yǎng)箱消化,,約3min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化,,輕輕吹打均勻細胞,,后可分3~6皿培養(yǎng);
生長條件 :37℃,,5%CO2,,CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液:90%DMEM-H+10?S,。DMEM-H:DMEM高糖培養(yǎng)液,,含谷氨酰胺,,丙酮酸鈉。
存儲條件:凍存則用6mL凍存液(90?S+10%DMSO)終止消化,,吹打均勻,,分為6支凍存管,用程序降溫盒于-80℃凍存,,過夜移至液氮中保存,。
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