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Minimal SD Base 酵母

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更新時間:2021-02-05 09:30:10瀏覽次數(shù):394次

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Minimal SD Base 酵母
酵母單雜交早是1993年由Li等從酵母雙雜交發(fā)展而來,通過對報告基因的表型檢測,,分析DNA與蛋白之間的相互作用,,以研究真核細胞內(nèi)的基因表達調(diào)控。由于酵母單雜交方法檢測某些轉錄因子與順式作用元件專一性相互作用的敏感性和性,,現(xiàn)已被用于克隆細胞中含量微弱的,、用生化手段難以純化的某些轉錄因子。

Minimal SD Base 酵母

 描述:

SDsynthetically defined)系列培養(yǎng)基屬于Minimal medium,,也可以稱為不*培養(yǎng)基,。Minimal SD Base由硫酸銨、微量元素,、葡萄糖按比例混合而成,,可以提供野生型酵母菌維持生存所需的基本物質(zhì),但不包含突變菌株的氨基酸,。Minimal SD Agar Base在前者基礎上加入Agar,。Minimal SD Base Gal/Raf由硫酸銨、微量元素,、半乳糖及棉子糖混合而成,;Minimal SD Base Gal由硫酸銨、微量元素、半乳糖混合而成,;Minimal SD Base Raf 由硫酸銨,、微量元素、棉子糖混合而成,,對應的固體培養(yǎng)基均在其基礎上加入Agar,。

 

Minimal Liquid Media with Glucose (Broth)

 

1. 1 L去離子水中加入相應量的Minimal SD BaseDropout Supplements(缺陷型氨基酸混合物),攪拌溶解,。

2. 調(diào)節(jié)pH 5.8,。121℃高壓15分鐘,。

3. 4℃冰箱避光儲存已經(jīng)的液體培養(yǎng)基,。

 酵母單雜交(Yeast one-hybrid)是根據(jù)DNA結合蛋白(即轉錄因子)與DNA順式作用元件結合調(diào)控報告基因表達的原理,克隆與靶元件結合的轉錄因子基因(cDNA)的方法,。其理論基礎是:許多真核生物的轉錄子由物理和功能上的DNA結合區(qū)(DNA-binding domain BD)和轉錄區(qū)(Activation domain AD)組成,,因此可構建基因與AD的融合表達載體,在酵母中表達為融合蛋白時,,根據(jù)報道基因的表達情況,,便能篩選出與靶元件有結合區(qū)域的蛋白。理論上,,在單雜交檢測中,,靶元件都可被用于篩選一種與之有結合區(qū)域的蛋白。

雙雜交系統(tǒng)的建立得力于對真核生物調(diào)控轉錄起始過程的認識,。細胞起始基因轉錄需要有反式轉錄因子的參與,。80年代的工作表明, 轉錄因子在結構上是組件式的(modular),, 即這些因子往往由兩個或兩個以上相互的結構域構成,,其中有DNA結合結構域(DNA binding domain,簡稱為BD)和轉錄結構域(activation domain,,簡稱為AD),,它們是轉錄因子發(fā)揮功能所的。單獨的BD雖然能和啟動子結合,,但是不能轉錄,。而不同轉錄因子的BD和AD形成的雜合蛋白仍然具有正常的轉錄的功能。如酵母細胞的Gal4蛋白的BD與大腸桿菌的一個酸性結構域B42融合得到的雜合蛋白仍然可結合到Gal4結合位點并轉錄,。

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