檢測(cè)血液中水平的循環(huán)microRNA（miRNA）的能力對(duì)于研究液體活檢以監(jiān)測(cè)進(jìn)展（例如癥或抗性）很重要,。關(guān)于miRNA的現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)方法依賴于實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）,，其靈敏度和性高但無(wú)法直接檢測(cè)全血中的miRNA,，需要對(duì)總RNA進(jìn)行分離和純化,，并且需要合成cDNA以測(cè)定miRNA的表達(dá)水平；是一項(xiàng)耗力,、耗時(shí)的過(guò)程,。對(duì)的血液樣品直接分析將使樣品損失小化并提供更和通用的測(cè)定。直接分析方法是很重要的,，因?yàn)樗鼈兛梢苑蛛x的RNA序列庫(kù)中的偏差,，例如由于分離過(guò)程中RNA的片段化導(dǎo)致的提取物的低完整性。因此,，需要可以直接檢測(cè)miRNA的臨床方法,。

金涂覆的磁性納米顆粒（Au@MNP）作為一種可分散電極。其中,，Au@MNP納米傳感器尋找分析物而不是分析物找到傳感界面,，這被證明是解決納米級(jí)有限傳質(zhì)速率的一種方法。使用Au@MNP作為可分散電極,，與在傳統(tǒng)的金電極表面上使用相同的傳感策略相比,，已被報(bào)道了檢測(cè)限和響應(yīng)時(shí)間的過(guò)1000倍。

通過(guò)電場(chǎng)誘導(dǎo)的由探針DNA修飾的鍍金磁性納米顆粒（DNA-Au@MNP）網(wǎng)絡(luò)的重新配置,，創(chuàng)建了的傳感器，用于直接分析與全血一樣復(fù)雜的樣品中的核酸,。該傳感器是一個(gè)能夠在未加工的血液樣本中檢測(cè)從10aM到1nM的miRNA濃度的傳感器,，檢測(cè)限為10aM。它可以區(qū)分生長(zhǎng)的小鼠血樣中miRNA濃度的微小變化,。

對(duì)于低檢測(cè)限的原因提出了兩點(diǎn)設(shè)想：一是雙鏈體的形成誘導(dǎo)DNA-Au@MNP之間距離的增加,，了通過(guò)DNA-Au@MNP網(wǎng)絡(luò)的電子隧穿，其中存在有限數(shù)量的雜交納米傳感器來(lái)自DNA-Au@MNP網(wǎng)絡(luò)的電化學(xué)響應(yīng),。二是利用電場(chǎng)對(duì)DNA-Au@MNP的磁性預(yù)組裝網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行極化,，可能通過(guò)重新定向雜化納米傳感器，使其更接近電極表面,，從而導(dǎo)致DNA-Au@MNP網(wǎng)絡(luò)向新的組裝體“重新配置”,。當(dāng)電場(chǎng)重構(gòu)DNA-Au@MNP網(wǎng)絡(luò)，雜化DNA-Au@MNP數(shù)量增加時(shí),，這種現(xiàn)象作為一種放大機(jī)制,，使得來(lái)自DNA-Au@MNP網(wǎng)絡(luò)的電化學(xué)電流受到更大的。隨后對(duì)這兩種設(shè)想進(jìn)行了一一驗(yàn)證,，所得結(jié)果與假設(shè)一致,。并探究了miRNA在細(xì)胞、外泌體、PBS緩沖液,、50%的全血和未加工全血中的檢測(cè),，也較好。

圖1 提出的miRNA檢測(cè)傳感策略所涉及的步驟示意圖,。(a)(b)：用與靶miRNA（a）互補(bǔ)的亞甲基藍(lán)標(biāo)記的探針DNA修飾的過(guò)量Au@MNP與樣品（b）混合,；(c)：30分鐘后，將Au@MNP與溶液磁性分離,，洗去未雜交的序列,；(d)：Au@MNP（雜交和未雜交）磁性地收集在金微電極的表面上；(e)：在雜交之前和之后獲得的穩(wěn)定峰值電流用于測(cè)量目標(biāo)分析物的量,。

圖2 確定電化學(xué)測(cè)量合成miR-21濃度的靈敏度,。(a)在將傳感器暴露于1pM合成miR-21溶液之前和之后獲得的方波伏安圖；(b)在將傳感器暴露于不同濃度的miR-21后雜交誘導(dǎo)的方波電流變化,，通過(guò)連續(xù)稀釋摻入三種不同基質(zhì)的合成miR-21的儲(chǔ)備溶液獲得：PBS（白色）,，健康人血清（灰色）和50％健康的人類血液（紅色）。

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zzj 2021.3.4