辣根過氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP）  比活性高，穩(wěn)定,，分子量小,，純酶容易制備，所以常用,。HRP分布于植物界,，辣根中含量高，它是由無色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結合而成的糖蛋白,，糖含量18%,。HRP由多個同工酶組成，分子量為40,000,，等電點為pH3～9,，酶催化的適pH因供氫體不同而稍有差異，但多在pH5左右,。酶溶于水和58%以下飽和度硫酸銨溶液,。HRP的輔基和酶蛋白吸收光譜分別為403nm和275nm，一般以OD403nm /OD275nm的比值RZ（德文Reinheit Zahl）表示酶的純度,。度的酶RZ值應在3.0左右（可達3.4）,。RZ值越小，非酶蛋白越多,。HRP的測定對學和化學的研究以及臨床的診斷具有很重要的意義.

實驗
儀器和試劑  LKB-1250發(fā)光光度計,；ModelSA 720酸度計;微量取樣器(50、100,、200,、500 uL);酶聯(lián)吸附板.Luminol溶液(5.0×10~3moL·dm~3):用0.1 moEdm-8NaHCOg-NaOH溶液容解配制;KI溶液: 2.0×10~3 moL-dm-3，HgO溶液:2.0×10-* moLdm3;HR溶液(1.0:10g-mL-1),、稱取100 mg HRP(RZ=2.5—3),溶解后,用蒸餾水稀釋至100 mL,，4℃冰箱保存．使用時用蒸餾水逐級稀釋;HRP的乙型肝炎抗原和抗體等的標記物:HBsAg-HRP、HBsAb-HRP,、HBoAb-HRP,、PHSAR-HRP。
操作步驟  于26 mL容量瓶中先加入約10mL水后,，加入1.0mL EDTA溶液(1.0 g·mL-1),2.5 nL2,0×10~3 moLdm-3KI溶液,，2.5 mL 2.0×10~moL·dm-3Hg0浴液,用水稀釋至標線,搖勻備用.
用微量取樣器吸取上述溶液200 pL于酶聯(lián)吸附板中，加入100 pL HRP(或其標記物),室溫暗處放置20 min后,取此溶液100 puL放入LKB-1250發(fā)光光度計反應室，從儀器加液處加入500 uL5.0×10-3 moL·dm-3 Luminol,，記錄反應所產(chǎn)生的光信號強度,，同時作空白試驗后,繪制發(fā)光強度與HRP濃度間的關系曲線.
結果與討論
偶合反應的時間性質 偶合反應的速度受酶促反應速度和化學發(fā)光反應速度兩者影響,在堿性介質中，低濃度的碘氧化Luminol的化學發(fā)光反應屬于的雙電子氧化的一級反應2,其反應機理為

偶合反應的條件
酶促反應的pH值﹐研究了HR催化Hg0z氧化KI生成I的反應中p互值的影響,，發(fā)現(xiàn)在pH3.5—3.7范圍內有較大的催化活性,，而I2氧化Luminol的反應則以pH10為佳.

無論是測定游離HRP還是其標記物,利用偶合反應化學發(fā)光分析法測定的靈敏度均高于直接催化法,因而能很好地用于化學發(fā)光酶分析中。

以下為部分產(chǎn)品列表

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