 | 月旭科技（上海）股份有限公司 |
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Ultimate系列 - 有機(jī)酸專用柱是
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但隨著分離純化的要求越來越高,，同時工藝開
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Ultimate®LP
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月旭Ultimate Plus C18液
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WM系列毛細(xì)柱擁有品種齊全的固定相,，包括
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苯硼酸小柱 固相萃取柱
Welc
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維生素B12,，又稱鈷胺素,，是人體必須的維生素之一，但人體對其需求量相對較少,，每天僅需3μg即可滿足,，維生素B12是wei一的一種需要腸道分泌物幫助才能被吸收的維生素，可以參與制造骨髓紅細(xì)胞,，防止惡行貧血,，防止大腦神經(jīng)受到破壞。但過多量的維生素B12可能導(dǎo)致神經(jīng)損害,、加重白血病或者引起過敏性疾病等問題,。國家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的維生素B12含量在嬰幼兒配方食品中為8.0μg/kg：兒童用乳粉為10~30μg/kg：孕產(chǎn)婦用乳粉為10~66μg/kg。
為保障廣大群眾食品安全,，月旭科技最新推出Welchrom® 維生素B12親和柱,，廣泛地應(yīng)用于飲料、牛奶和奶粉,，飲料等樣品的提取,，對提高食品的質(zhì)量和安全性起到十分重要的作用。*符合GB 5009.285-2022食品中維生素B12的測定等國家食品安全標(biāo)準(zhǔn),。
原理
Welchrom® 維生素B12免疫親和柱測定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),，維生素B12單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上，樣品中的維生素B12經(jīng)過提取,、過濾,、稀釋，然后將樣品提取液緩慢的通過維生素B12免疫親和層析柱,，在免疫親和柱內(nèi),，維生素B12與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他物質(zhì),。用甲醇洗脫維生素B12,，然后注入到分析儀器中用于檢測。
凈化步驟
01
取10g試樣于50mL離心管中,，加入30mL乙酸鈉緩沖液,，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至4.0,，加入0.2g胃蛋白酶、0.05g淀粉酶和２mL氰hua鉀溶液,，充分混合,。將樣品溶液放入水浴恒溫振蕩器，在37℃,，振蕩酶解30min,。
02
酶解后轉(zhuǎn)入100℃水浴中，保持30min,，取出冷卻至室溫,。將樣品溶液轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度,，搖勻,。
03
移取上述溶液40mL至50mL離心管中，在10000r/min下離心10min,，取上清液用玻璃纖維濾紙過濾后備用,。
04
將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器,。
05
將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/S的流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體,。
06
以10.0mL的PBS溶液和去離子水依次淋洗柱子1次,，流速約為1-2滴/S，棄去全部流出液,，并使2mL~3mL空氣通過柱體,。
07
準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1滴/S,，收集全部洗脫液于玻璃試管中,，供檢測用。
色譜條件
色譜柱：月旭UItimate® XB-C18（4.6×150mm,，3μm）,。
流動相：
柱溫：40℃；
紫外檢測器：361nm,；
流速：0.8mL/min,；
進(jìn)樣量：100μL。
流動相配置
A（0.04%三氟yi酸）：移取200μL三氟yi酸,，加入500mL水,，混勻。
B（乙腈）：色譜級乙腈，抽濾,。
譜圖
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