色譜柱的正確使用
色譜柱是昂貴的色譜耗材，正確的使用和維護(hù)對(duì)保證色譜柱的正常使用和延長(zhǎng)壽命至關(guān)重要。
1. 色譜柱使用前注意事項(xiàng)：
1) 色譜柱內(nèi)的存儲(chǔ)液：
月旭公司色譜柱的存儲(chǔ)液,，如沒(méi)有特殊說(shuō)明均為質(zhì)檢報(bào)告中所述流動(dòng)相,，檢測(cè)前，請(qǐng)用相互溶的試劑將其替換,。
2) 新色譜柱的平衡：
新反相色譜柱：用純甲醇或者純乙腈沖洗色譜柱30個(gè)柱體積（1個(gè)柱體積=空柱管體積×0.7）,，再更換成能與檢測(cè)流動(dòng)相互溶的流動(dòng)相沖洗30個(gè)柱體積，zui后用流動(dòng)相穩(wěn)定系統(tǒng)至基線平穩(wěn),；
新正相色譜柱：反相使用異丙醇低流速（0.2ml/min）沖洗30個(gè)柱體積,；正相使用采用正己烷分析流速?zèng)_洗30個(gè)柱體積，再更換成能與檢測(cè)流動(dòng)相互溶的溶劑沖洗30個(gè)柱體積,，zui后用流動(dòng)相沖洗穩(wěn)定系統(tǒng)至基線平穩(wěn)待檢測(cè),。
2. 色譜柱的使用方向：
月旭公司生產(chǎn)的液相色譜柱標(biāo)簽上的箭頭方向?yàn)榱鲃?dòng)相流向，使用過(guò)程時(shí)也按此方向連接出入口,，避免雙向混用，導(dǎo)致兩端填料同時(shí)污染,，不利于色譜柱的再生和維護(hù),。
3.流動(dòng)相和樣品保持潔凈：
由于懸浮在樣品或流動(dòng)相中的細(xì)小顆粒會(huì)堵塞色譜柱兩端的篩板，各種試劑盡量使用色譜純級(jí)的,，用量少的試劑純度至少是分析純,，水是超純水和全玻璃器皿雙蒸水，使用前建議用0.45μm的濾膜過(guò)濾,；
樣品溶液使用針頭式過(guò)濾器,；
樣品中的雜質(zhì)是造成色譜柱污染、柱效下降的zui主要原因之一,，復(fù)雜樣品可選樣品預(yù)處理柱（SPE柱）進(jìn)行前處理,，如果不方便處理，建議使用與分析柱相匹配的保護(hù)柱,。樣品溶劑與流動(dòng)相要相匹配,，不能出現(xiàn)樣品溶劑與流動(dòng)相不互溶，極性相差太大等情況,，否則會(huì)造成色譜峰形變差,、鬼峰等現(xiàn)象，使用流動(dòng)相溶解樣品能有效的避免上述情況發(fā)生,。
4.色譜柱允許使用的pH范圍：
每款色譜柱都有自己特定允許使用的pH范圍,，請(qǐng)仔細(xì)對(duì)照您的色譜柱的使用pH范圍（表一），在pH范圍以外使用,，會(huì)使硅膠基質(zhì)溶解或鍵合相水解,，對(duì)色譜柱造成不可恢復(fù)的損傷，如果在臨界pH處使用，分析結(jié)束后立即用適合于色譜柱保存并與當(dāng)前使用的流動(dòng)相互溶的淋洗液置換掉,。
色譜柱的保存
短時(shí)間保存：
間隔不超過(guò)四天,，色譜柱按平時(shí)維護(hù)程序沖洗至基線平穩(wěn)，反相色譜柱保存在不含有緩沖鹽,、離子對(duì)試劑的有機(jī)相/水溶液中,，有機(jī)相不低于20%；正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中,，反相使用保存在純有機(jī)溶劑中,，并將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。
長(zhǎng)期保存：
反相色譜柱保存在80%甲醇或80%乙腈水溶液中,；正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中,，反相使用時(shí)需將柱內(nèi)存儲(chǔ)液用異丙醇置換，zui后用正己烷保存,，將色譜柱從儀器上取下,，并將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。
色譜柱的日常維護(hù)（推薦反向沖洗）：
反相使用（包括反相色譜柱和正相色譜柱反相使用）清洗方法：
1) 未使用緩沖鹽,，分析完成后用80%甲醇或80%乙腈反向沖洗色譜柱10-20個(gè)柱體積,，保存柱子；
2) 使用緩沖鹽,，用過(guò)渡流動(dòng)相或者低比例有機(jī)相反向沖洗柱子10-20個(gè)柱體積去除緩沖鹽,，用80%甲醇或80%乙腈反向沖洗色譜柱10-20個(gè)柱體積，保存柱子,；
3) 使用離子對(duì)試劑,，用過(guò)渡流動(dòng)相或者低比例有機(jī)相反向沖洗柱子10-20個(gè)柱體積去除緩沖鹽，再用50%甲醇反向沖洗柱子10個(gè)柱體積,，zui后用80%甲醇反向沖洗色譜柱10-20個(gè)柱體積,，保存柱子。
正相使用（正相色譜柱正相使用）清洗方法：
分析結(jié)束后,，用異丙醇反向沖洗10~20個(gè)柱體積再換正己烷反向沖洗柱子10-20個(gè)柱體積,，保存柱子。
色譜柱的異常維護(hù)（按照日常維護(hù)沖洗方向）
1. 柱壓升高
柱壓升高是每個(gè)色譜工作者都很頭疼的問(wèn)題,，長(zhǎng)時(shí)間使用造成柱壓的緩慢升高通常是正?，F(xiàn)象；短時(shí)間甚至是突然的柱壓升高通常是異常升高,，排除儀器的故障,，確定是色譜柱自身原因，一般有以下幾點(diǎn)：
1) 柱頭的過(guò)濾篩板污染（固體顆粒物堵塞,、強(qiáng)保留物質(zhì)累積）：
解決方法：
a.在柱前端加上在線過(guò)濾器或保護(hù)柱,，用甲醇/水=20/80 1.0ml/min反向沖洗色譜柱180min,；
b.在柱前端加上在線過(guò)濾器或保護(hù)柱，反向使用,；
c.可將柱頭打開(kāi),，將色譜柱頭中過(guò)濾篩板取出，在稀硝酸溶液內(nèi)超聲清洗20min,，純水超聲清洗20min,，zui后用甲醇超聲清洗20min，重新裝入色譜柱,。
2) 柱頭填料污染（固體顆粒物堵塞,、強(qiáng)保留物質(zhì)累積）：
解決方法：
a.用可以溶解污染物的溶劑較長(zhǎng)時(shí)間（180min）反向沖洗色譜柱；
b.可將柱頭打開(kāi),，小心取出被污染的填料,，用相同的填料重新裝入修復(fù)。
3) pH使用不當(dāng)造成的損傷：
解決方法：
pH使用不當(dāng)造成固定相的缺失或塌陷,，很難使色譜柱恢復(fù),，只能更換色譜柱。
2. 推薦使用保護(hù)柱和在線過(guò)濾器：
樣品和流動(dòng)相中不能*過(guò)濾掉及泵磨損,、密封圈和管路老化產(chǎn)生的固體顆粒物,，進(jìn)入到色譜柱中就會(huì)堵塞篩板，導(dǎo)致柱壓升高,，柱效下降，保護(hù)柱和在線過(guò)濾器上都有篩板,，孔徑與分析柱的孔徑相同,，能阻止顆粒物到達(dá)色譜柱，在分析故障中,，柱壓升高占很大比例,，因此建議您在色譜柱前端加上在線過(guò)濾器或者保護(hù)柱。
3. 緩沖鹽的正確使用：
緩沖鹽通常易溶于水,，難溶于有機(jī)溶劑,，其使用不當(dāng)會(huì)析出，加快泵柱塞桿和密封圈,，流通閥的磨損,，堵塞色譜柱頭篩板，填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的間隙,，使填料板結(jié)柱壓升高,，阻礙基質(zhì)上鍵合相的碳鏈自由舒展，使色譜柱保留能力下降,，柱效降低,，縮短其使用壽命,，緩沖鹽析出后很難去除，因此正確的使用緩沖鹽對(duì)延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命非常重要,，具體方法如下：“使用前過(guò)渡! 使用后沖洗!”
分析前用過(guò)渡流動(dòng)相沖洗柱體積5~10個(gè)柱體積,，分析完成后按照色譜柱日常維護(hù)2)項(xiàng)處理；
過(guò)渡流動(dòng)相：有機(jī)相和水相的比例和分析流動(dòng)相中兩相比例一致,，或者水相比例高于分析流動(dòng)相,，不含緩沖鹽。
緩沖鹽析出處理方案：
1) 方案1：用甲醇/水＝10/90以分析速度流速35℃條件下反向沖洗色譜柱40個(gè)柱體積,；
2) 方案2：用甲醇/水＝10/90以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過(guò)夜,。
4. 避免強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱保留：
強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積，是一個(gè)緩慢的過(guò)程,，一段時(shí)間后會(huì)對(duì)樣品成分產(chǎn)生額外的保留行為,，引起峰變寬，拖尾,，使柱效下降,，保留時(shí)間變化，到一定程度時(shí)會(huì)導(dǎo)致柱壓升高,，對(duì)許多樣品特別是復(fù)雜樣品很難判斷其是否含有強(qiáng)保留物質(zhì),，因此要預(yù)防這一切的方式，堅(jiān)持每天分析完成后用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個(gè)柱體積以上,。但若長(zhǎng)時(shí)間沒(méi)有反向沖洗的柱子,，請(qǐng)謹(jǐn)慎反沖。
注意：不要輕易打開(kāi)柱頭,，因?yàn)橹^一旦打開(kāi),，很難恢復(fù)到新柱的水平，因?yàn)橹^打開(kāi)而造成的檢測(cè)后果,，客戶自行負(fù)責(zé),。
各種鍵合相色譜柱的再生(請(qǐng)慎用)
色譜柱作為液相色譜中昂貴的色譜耗材，會(huì)隨著使用時(shí)間和進(jìn)樣次數(shù)的增加,，會(huì)出現(xiàn)異常的色譜現(xiàn)象,，如果一根色譜柱的柱效太低或者柱壓太高，通常認(rèn)為該色譜柱使用壽命已到,，為了延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命,，除了*按照每一款色譜柱的性能使用以外，適當(dāng)?shù)纳V柱再生是很有效的途徑：
1. 氰基(CN)色譜柱的維護(hù)和再生：
CN柱屬于中等極性的固定相,，作反相色譜時(shí)操作和維護(hù)和C18柱*相同,，增加水相比例，可以促進(jìn)樣品的洗脫,，但是CN屬于短鏈的鍵合相,，水相比例太高易使CN鍵水解,，尤其在色譜柱pH耐受范圍以外，酸性和堿性條件下柱壽命會(huì)下降很快,，如果在這個(gè)條件下使用,，需要按以下程序用15個(gè)柱體積溶液沖洗，如下：
過(guò)渡流動(dòng)相–95%乙腈并保持95%乙腈繼續(xù)沖洗,，以低流0.2mL/min過(guò)夜沖洗,；
在pH耐受范圍條件使用時(shí)，也比較傷柱子,，要注意沖洗,，可以參照上述方法，時(shí)間可適當(dāng)減少,。CN柱用于正相時(shí),，當(dāng)柱子使用一定時(shí)間后，柱效下降,，可清洗一下恢復(fù)柱性能,，再生時(shí)用10個(gè)柱體積的下列溶液沖洗：氯仿 –異丙醇–二氯甲烷再走流動(dòng)相即可；
CN柱的pH范圍在pH 2.0-8.0,。
2. 反相柱的再生：
反相色譜柱是使用zui普遍的色譜柱之一,，除按照以上內(nèi)容使用以外，必要的再生清洗可以有效的延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命,，用下列每種溶劑20~30個(gè)柱體積沖洗：
100％甲醇–100％乙腈–100％異丙醇–100％二氯甲烷或100％正己烷–100％異丙醇–100％甲醇
3. 正相色譜柱的再生：
正相柱的鍵合官能團(tuán)氨丙基,、二羥基丙基等要比C18,C8柱的鍵合官能團(tuán)易水解，所以其使用壽命稍短,，特別是使用反相條件時(shí),，要嚴(yán)格控制pH值范圍，pH值越低流動(dòng)相中水的比例越高越易發(fā)生水解,。
填料被樣品中雜質(zhì)累積污染,，色譜柱表現(xiàn)行為柱壓增高柱效降低等,，依次用下列程序沖洗柱子：
甲醇–乙腈–異丙醇–氯仿–正己烷–氯仿–異丙醇–甲醇（各以0.5ml/min的流速,，20個(gè)柱體積），再換流動(dòng)相,。
用氨基柱檢測(cè)酸性物質(zhì)可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,，一定程度上改變對(duì)某類(lèi)的分析物保留性質(zhì)或表現(xiàn)為柱效下降，再生建議是：用5-10個(gè)的柱體積的含0.5-1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液沖洗（沖洗后用不含堿的流動(dòng)相洗去多余的氨）,，分析酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1％,。
如何改善和提高正相色譜的重現(xiàn)性？
在正相色譜分離模式中,，水是一種溶劑強(qiáng)度非常高的溶劑,，即便流動(dòng)相中有少量的存在就能對(duì)保留時(shí)間產(chǎn)生強(qiáng)烈的影響,，特別是在硅膠或氧化鋁為固定相而使用的流動(dòng)相非極性或疏水性很強(qiáng)的情況下尤
其是這樣。因?yàn)橥闊N類(lèi)溶劑天然含水量極低,，基于無(wú)水烷烴的流動(dòng)相,，需要很長(zhǎng)時(shí)間才能和環(huán)境中水分達(dá)成平衡。所以,，正相色譜柱使用幾天后就觀察到保留時(shí)間有漂移的現(xiàn)象是司空見(jiàn)慣的,。可能正是存在這個(gè)令人頭疼的問(wèn)題,，成為了當(dāng)今正相色譜沒(méi)有反相色譜那么普及常用的主要原因,。有一個(gè)非常有效的改善正相色譜保留時(shí)間重現(xiàn)性的方法：使用和水“半飽和”的正相流動(dòng)相。
“半飽和”流動(dòng)相配置方法：將無(wú)水的非極性流動(dòng)相分成兩半,；其中一半中加入一定量水,，并混勻攪拌約一小時(shí)，靜止分層后,，將多余的水相全部除去,；將無(wú)水的一半流動(dòng)相和已與水飽和過(guò)的另一半流
動(dòng)相兩部分重新混合在一起，就配成了“半飽和”流動(dòng)相,。
正相色譜柱除水：
正相柱一般用的流動(dòng)相是正己烷等非極性溶劑,水是強(qiáng)極性溶劑,正相色譜中用的量很少,，水含量稍微一點(diǎn)的小變化，就會(huì)對(duì)出峰時(shí)間有很大的影響,，所以正相色譜對(duì)水分含量極敏感,。正相填料，硅膠,、
氨基,、CN基等，本身并無(wú)特殊,，也不是碰到水就會(huì)損壞的,。隨著時(shí)間的推移，正相填料會(huì)因?yàn)槲搅诉^(guò)多的水分而改性,，導(dǎo)致保留能力改變,，故需要按使用下列溶劑對(duì)固定相進(jìn)行脫水：
含2.5% 二甲氧基丙烷（dimethoxypropane）和2.5% 冰醋酸的正己烷沖洗30個(gè)柱體積。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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