Xtimate® Sugar-H保護柱是采用磺化聚苯乙烯/二乙烯基苯填料填裝制成的氫型強陽離子交換柱的保護柱,,對在同類型分析柱上有強保留和不可逆吸附的物質進行保留,并對固體顆粒物進行有效阻擋,,有效的延長分析柱的使用壽命,。
使用步驟
1. 將Xtimate® Sugar-H保護柱連接在分析柱和進樣器之間;
2. 設置流速在0.2-0.3ml/min直到柱溫達到分析溫度,;
3. 在柱溫達到分析柱溫時,,流速增至分析流速,流速變化應該以0.1ml/min為增量,,待反壓穩(wěn)定后再繼續(xù)增加流速,。zui大流速應使壓力不超過1500psi。
流動相要求
常用5 ~10 (mmol/l)的硫酸作為流動相,。推薦的流動相用去離子的無菌水配制,,水應去離子化,大于2兆歐的電阻率,,水中應不含多價離子,,尤其是過渡金屬元素和重金屬離子。使用前需用真空泵通過0.45μm或更小孔徑的濾膜除去細菌和其它顆粒,,溶劑過濾推薦使用溶劑過濾器,,合適的濾膜為Millipore的HAWP04700。
雖然流動相已經(jīng)在真空過濾時脫氣,,但還是應該通過以下程序來*脫氣,。如果系統(tǒng)連續(xù)使用不止一天,請將流動相置于錐形瓶中,,放在攪拌器/電爐上,,用鋁箔封上瓶口以減小蒸發(fā),用前將流動相燒至沸點幾分鐘,,使用時保持溫度70-90℃,。這個操作能夠保證氣體(尤其是 CO2)不再重新溶解在流動相中,同時也會防止微生物的滋生,。
要保持裝流動相的容器干凈,,有蓋,,且新鮮,,流動相需每24小時重新配制,。
注意事項
通常推薦壓力不超過1500psi;
zui大流速推薦不超過0.6ml/min(70℃) ,;
流動相中有機相的zui大含量為5%(V/V),,樣品中少量的乙腈,乙醇,,甲醇和異丙醇不會影響柱子的性能,;
柱子的溫度不要超過95℃。通常高溫會帶來高的分辨率,,但在90-95℃之間幾乎沒有變化,,70℃以下對于許多糖,就異構體的分離來說不能提供足夠的分辨率,,對于乙醇的定量,,柱溫應在75℃;
柱溫的快速變化不會對柱子帶來什么反作用,,如果柱子在60℃以下,,那么zui高的流速為0.2ml/min,由于水在低溫時的高的粘度因此高的流速會帶來很高的反壓,;
定期反向沖洗保護柱和分析柱(在每5L流動相之后),,以延長色譜柱的壽命;
流速的變化不能超過0.5ml/min,,流速變化應該緩慢進行,,建議改變流速時以0.1ml/min為增量,直到反壓穩(wěn)定后再繼續(xù)增加流速,。任何的流速變化均要在不超過0.5ml/min下進行,;在溶劑輸出系統(tǒng)中壓力限制的設定應比普通的工作壓力高出幾百psi,從而避免任何儀器未被注意的額外壓力升高,。
保存條件
長期保存(72小時以上不用),。關掉柱溫箱,停泵,。當柱子冷卻,,從系統(tǒng)中移出,,換上起初隨柱子的堵頭,,柱子在保存過程中要防止揮干,,通常的流動相都可作為保存柱子的適宜溶劑。在冰箱中5℃保存(不要冷凍),,以防止微生物的滋生,;柱子拆掉后要用不銹鋼堵頭裝在系統(tǒng)上,,沖洗整個液相色譜系統(tǒng)先用水,,然后用甲醇,,zui后系統(tǒng)保存在甲醇中,。
在關機后的重新啟動。當開啟帶有一個柱溫很低的柱子的系統(tǒng)時,,打開柱溫箱,,流速開始不要超過0.2ml/min,。待系統(tǒng)在此條件下穩(wěn)定至少二十分鐘達到工作溫度后再按通常的工作條件操作,。
整夜的停機(放置少于72小時),。柱子留在系統(tǒng)中流速降到0.2ml/min。循環(huán)溶劑,,將流出的管路插入流動相瓶中,如果不想開著柱溫箱,,那就關掉泵和柱溫箱讓其冷卻,。
在整夜停機后的開啟。打開柱溫箱,,流動相的流速不要超過0.1-0.2ml/min,,保持此流速至少二十分鐘直到達到柱子工作所需溫度,,然后再按照通常分析條件來設置。
故障檢查
Sugar-H保護柱是以樹脂的膨脹形態(tài)緊密裝填的,,如果樣品進行了很好的前處理,那么大部分產生的問題都和樹脂填料有關,,由于單向閥的損壞或是突然地反壓增加,,脆弱的樹脂填料可能被泵的波動沖到柱子的后篩板處。反壓的增加是否會發(fā)生,,要經(jīng)常檢查在線過濾器以及保護柱中是否截留了微粒,。如果不是此問題,,那么很可能是樹脂部分地堵在了出口端的篩板處,,檢查這種情況是否發(fā)生需要關掉泵,將柱子的流路方向反過來,,然后泵流速開到0.1ml/min,20分鐘達到工作溫度后再設至工作時的流速,。
柱子的再生步驟
Sugar-H色譜柱的再生方法根據(jù)相關的樣品純度有不同的變化,越是天然物(尤其是含有那些重金屬和過渡金屬元素或是有機酸的樣品),,越需要經(jīng)常地對柱子進行再生,,因為它們會與柱子發(fā)生置換。
如果主峰有拖尾,,那么柱子需要做以下處理:
配制 500ml的再生溶液(Ca EDTA 500mg/L),,把保護柱和分析柱作為整體將流路方向反過來,,在90℃下以0.5ml/min的流速沖洗一整夜,。再生之后回到正常方向使用,,當柱子反沖時很重要的一點是需要
保持溶劑的溫度從而確保正確的沖洗,用冷的溶劑將會延緩沖洗的過程,;主峰沒有改善,請更換保護柱柱芯,。
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