您好, 歡迎來(lái)到化工儀器網(wǎng)
會(huì)員.png)
10
色譜柱粒徑越小，分離度一定越好嗎,？
在液相色譜方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中，色譜柱對(duì)于分離效果的影響是最大的。色譜柱的參數(shù)包括：鍵合相,、柱長(zhǎng),、直徑、粒徑,、孔徑,。
做過(guò)液相的工程師肯定都深深記牢這句口訣：
同等長(zhǎng)度的色譜柱，粒徑越小,，分離效果越好,；
同等粒徑的色譜柱，長(zhǎng)度越長(zhǎng),，分離效果越好,；
同等粒徑的色譜柱，內(nèi)徑越小,，最佳的體積流速越小,。
那么，在相同的方法條件下,，同等長(zhǎng)度的色譜柱,，粒徑越小，分離效果一定越好嗎,？小編帶您在實(shí)操中一探究竟,。
案例一：兒茶酚胺及代謝物的測(cè)試
兒茶酚胺即含有鄰苯二酚（即兒茶酚）結(jié)構(gòu)的胺類化合物，包括多巴胺,、去甲腎上腺素和腎上腺素及它們的衍生物,。
案例二：某雜質(zhì)A和雜質(zhì)B的分離
從上兩圖中可以看出，在方法不做大的調(diào)整情況下,，使用月旭AQ-C18（4.6*250mm,，3μm）規(guī)格的色譜柱，雜質(zhì)A和雜質(zhì)B之間的分離度僅達(dá)到1.2（圖3）,。經(jīng)過(guò)多種方法的優(yōu)化,，雜質(zhì)A和雜質(zhì)B的分離度仍徘徊在1.2左右。
更換月旭AQ-C18（4.6*250mm,，5μm）規(guī)格的色譜柱,，僅調(diào)整流速，雜質(zhì)A和雜質(zhì)B之間的分離度達(dá)到1.6（圖4）,，滿足分析要求,。
原理分析：
Van Deemter方程第一項(xiàng)即為渦流擴(kuò)散項(xiàng)。色譜柱中充滿了固定相填料,，而這些填料的存在會(huì)阻礙溶質(zhì)分子運(yùn)行,，填料粒徑越大,，溶質(zhì)分子“繞行"距離就越遠(yuǎn)，即在填料孔徑中停留的時(shí)間就越長(zhǎng),。
在案例一中：兒茶酚胺類物質(zhì)屬于強(qiáng)極性物質(zhì),，在色譜柱上保留弱。在相同填料,、相同內(nèi)徑和長(zhǎng)度的色譜柱以及檢測(cè)條件下,，相同流速的流動(dòng)相對(duì)保留在3μm粒徑的UHPLC色譜柱上的兒茶酚胺類物質(zhì)的洗脫能力比1.8μm粒徑的UHPLC色譜柱的要弱，所以達(dá)到了分離度增加的效果,。
在案例二中：色譜柱均為4.6*250mm規(guī)格的色譜柱,，僅粒徑不同。該規(guī)格下5μm粒徑的色譜柱最佳流速為1mL/min,，3μm粒徑的色譜柱最佳流速需要達(dá)到1.67mL/min,，而這個(gè)流速下的壓力已經(jīng)超過(guò)HPLC的耐壓值，故無(wú)法采用最佳流速,。最終,，5μm粒徑的色譜柱使用的是最佳流速1mL/min，3μm粒徑的色譜柱僅使用0.8mL/min的流速,，遠(yuǎn)低于最佳流速,，故分離效果并沒(méi)有5μm色譜柱好。
經(jīng)過(guò)以上兩個(gè)案例,，對(duì)于較難分離的分析物,，小伙伴們?nèi)绻麌L試多種方法仍未達(dá)到令人滿意的分離效果，不妨嘗試把色譜填料的粒徑改大或改小,，都可以試試,，可能會(huì)有意想不到的效果哦！