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磷酸鹽緩沖溶液配制方法及優(yōu)化案例
緩沖液的作用是在一定的范圍內(nèi)緩沖調(diào)整溶液的pH值,，使待測(cè)溶液的酸度符合分析方法所規(guī)定的范圍。其中,，磷酸鹽緩沖液截止波長(zhǎng)低于200nm,，在較低分析波長(zhǎng)下仍可使用，具有三個(gè)pKa值,，可提供1.1~3.1,，6.2~8.2，11.3~13.3三個(gè)pH緩沖范圍,，是HPLC在紫外檢測(cè)條件下zui常用的緩沖液之一,。
配制磷酸鹽緩沖液時(shí)，通常所說的濃度0.01M指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度,，而非Na+或K+的濃度,，Na+或K+的作用是調(diào)節(jié)滲透壓。
各種濃度PB(pH=7.4)的配制：
先配0.2M PB（pH=7.4,，100mL）：取0.2 mol/L的Na2HPO4母液81mL及0.2mol/L的NaH2PO4母液19mL,，混勻。然后只需將0.2M PB（pH=7.4）按相應(yīng)比例
適當(dāng)稀釋即可,，如：
0.1M PB（pH=7.4）：取500mL 0.2M PB,，加水稀釋至1L,。
0.01M PB（pH=7.4）：取50mL 0.2M PB，加水稀釋至1L,。
0.02M PB（pH=7.4）：取100mL 0.2M PB,，加水稀釋至1L。
以上配制方法可供參考,。日常配制流動(dòng)相時(shí)常使用緩沖鹽搭配酸/堿溶液進(jìn)行pH調(diào)節(jié),。
在使用酸/堿溶液調(diào)節(jié)緩沖溶液的pH時(shí)，使用低濃度（0.1mol/L）比使用高濃度（1mol/L）引起的誤差更小,，對(duì)緩沖溶液pH的重復(fù)性和分析結(jié)果的重現(xiàn)性更有優(yōu)勢(shì),，尤其是針對(duì)一些對(duì)pH敏感的分析項(xiàng)目。
應(yīng)用案例：
客戶反饋參考應(yīng)用報(bào)告的液相條件,，同一臺(tái)液相,，不同天配制的流動(dòng)相，配制方式一樣,，分離重現(xiàn)性不好,，有時(shí)能分開，有時(shí)會(huì)重合無法分離,。了解到客戶稱取磷酸鹽后溶于1L超純水中后,，再滴加1mol/L堿溶液進(jìn)行pH調(diào)節(jié)。此方法容易造成配制差異,，引起峰分離情況差異,。
優(yōu)化流動(dòng)相配制方法：
① 精密稱取Mg±0.001g磷酸鹽，溶于約800mL超純水中溶解,。
② 預(yù)先配制0.1mol/L氫氧化鈉/氫氧化鉀溶液,，稱樣量Ng±0.001g，用量筒準(zhǔn)確量取100mL堿溶液備用,。
③ 將量取的堿溶液緩慢加入已溶解的磷酸鹽溶液中,，觀察pH變化，達(dá)到目標(biāo)pH后,，停止加入堿溶液,，記錄所需堿溶液體積。
④ 再在緩沖鹽溶液中加入超純水定容至1L,。
⑤ 后續(xù)配制只需量取固定體積的堿溶液加入固定稱樣量的緩沖溶液中，即可達(dá)到固定的pH,。成功減小流動(dòng)相配制差異,，提高峰分離重現(xiàn)性。
效果見下圖：
結(jié)論：
流動(dòng)相pH的穩(wěn)定性與準(zhǔn)確性對(duì)樣品分析的影響較大時(shí),，需盡量規(guī)避流動(dòng)相配制時(shí)的人員誤差,，環(huán)境誤差,，儀器誤差，物料稱量誤差等,，以保證方法分析效果的重現(xiàn)性,。