哈嘍,小伙伴們,,還記得上個(gè)世紀(jì)五,、六十年代震驚世界的“反應(yīng)停事件"嗎?反應(yīng)停學(xué)名為沙利度胺Thalidomide,,結(jié)構(gòu)見下圖,,其消旋體曾被用作緩解妊娠反應(yīng)的藥物。但是后來才發(fā)現(xiàn)其中的R-型異構(gòu)體才是有效的抗嘔吐成分,,可減輕妊娠e心,、嘔吐等癥狀;而S-型異構(gòu)體則會(huì)導(dǎo)致嬰兒畸形,,結(jié)果當(dāng)時(shí)在西德,、荷蘭和日本等地區(qū)產(chǎn)生了大批的畸形兒。
隨著生物工程和生命科學(xué)的發(fā)展,,科學(xué)家已經(jīng)認(rèn)識(shí)到,,手性化合物例如手性藥物異構(gòu)體盡管其物理和化學(xué)性質(zhì)幾乎wan全相同,只有旋光性不同,,但它們在生物體內(nèi)的生理活性和藥理作用卻存在很大的差別,。為此,制藥行業(yè)中,,必須對有效成分的對映體進(jìn)行拆分,,而不能將其混合物作為藥物出售。
采用液相色譜法分離手性化合物,,是目前shou選方法之一,,要考慮手性柱的固定相類型、分離模式及流動(dòng)相溶劑。現(xiàn)在市面上手性固定相類型較多,,手性色譜有正相分離和反相分離兩種模式,,流動(dòng)相溶劑的選擇與固定相、樣品性質(zhì),、分離模式有關(guān),。今天,小編就和大家聊聊,,如何選擇合適的手性分離模式,。
正相分離模式
當(dāng)樣品溶于非極性溶劑中,選擇正相分離模式,。常用的流動(dòng)相組合是烷烴類和醇類,。其中,醇類起到了洗脫作用,,烷烴類用來調(diào)節(jié)流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度,。
烷烴類試劑,可選擇正己烷,、正戊烷,、異己烷、正庚烷,,它們對樣品分離沒有太大影響,,不會(huì)改變選擇性和分離度,選擇正己烷較多,。
流動(dòng)相中的醇類,,對目標(biāo)物的分離起關(guān)鍵作用,不同的醇有不同的選擇性,,且隨著流動(dòng)相中醇類的比例提高,,目標(biāo)峰的保留時(shí)間縮短。zui常用的醇類是乙醇和異丙醇,,它們的洗脫能力是:乙醇>異丙醇,。甲醇在烷烴中的溶解性不好,正己烷中甲醇的最大含量是5%,。如果要在烷烴中加入甲醇,,最好同時(shí)加入一定量的乙醇,提高流動(dòng)相的溶解性,。
在手性色譜中,,為改善目標(biāo)物的峰形,需要在流動(dòng)相中添加酸或者堿,。如果目標(biāo)物是酸性化合物,,往往要在流動(dòng)相中加入酸性添加劑,,如三氟yi酸、乙酸,、甲酸等,。如果目標(biāo)物是堿性化合物,要在流動(dòng)相中加入堿性添加劑,,如二乙胺,、三乙胺、丁胺,、乙醇胺等。酸性或堿性添加劑的加入量一般為0.1%~0.3%,,最大不超過0.5%,,要注意色譜柱的pH耐受范圍。
需要注意的是:
1,、正相色譜柱安裝前,,必須先用合適的流動(dòng)相沖洗整個(gè)儀器管路,包括進(jìn)樣器,。有些試劑(如丙酮,、氯仿、二甲基甲酰胺(DMF),、二甲基亞砜,、乙酸乙酯、二氯甲烷,、THF)會(huì)破壞手性固定相的結(jié)構(gòu),,請不要使用這些溶劑作為流動(dòng)相的組成部分,或者作為樣品稀釋劑,。如果有無法確定的,,請咨詢廠家。
2,、色譜柱能使用純甲醇或者純乙腈作為流動(dòng)相,,如果要將正己烷換成甲醇或者乙腈,或者換成其他極性溶劑,,需要用純異丙醇作為溶劑充分過渡,。
3、正相手性柱應(yīng)避開含水的流動(dòng)相,。
“
應(yīng)用案例
溴甲ji苯異丙酸消旋體的測定
液相條件
色譜柱:Ultimate® Cellu-J(4.6×250mm,,5μm) 。
流動(dòng)相:正己烷:乙醇:三氟yi酸(90:10:0.1),;
檢測波長:220nm,;
柱溫:25℃,;
流速:1mL/min;
進(jìn)樣量:10μL,;
樣品配置:1mg/mL,,乙醇/正己烷(1/1)溶解。
反相分離模式
如果樣品溶于含水極性溶劑時(shí),,選擇反相分離模式,。常用的流動(dòng)相組合是有機(jī)相和水相。其中,,水相用來調(diào)節(jié)流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度,,常用的水相可以是磷酸鹽緩沖液,或者是純水,。有機(jī)相起到了洗脫作用,,常用的有機(jī)相是乙腈、甲醇,、乙醇,、異丙醇等,且有機(jī)相比例越高,,目標(biāo)物的保留時(shí)間越短,。
“
應(yīng)用案例
鹽酸達(dá)泊xi汀的測定
液相條件
色譜柱:Ultimate® Cellu-JR(4.6×250mm,5μm) ,。
流動(dòng)相:甲醇:乙醇:二乙胺(95:5:0.1),;
檢測波長:220nm;
柱溫:20℃,;
流速:0.6mL/min,;
進(jìn)樣量:5μL;
樣品配置:1mg/mL,,甲醇溶解,。
目前,月旭科技的手性固定相填料包括 Cellu-D,、Cellu-J,、Amy-D等,可以滿足絕大多數(shù)手性樣品分離需求,。各位小伙伴有手性樣品分離或需要篩選柱子,,歡迎聯(lián)系月旭售前技術(shù)熱線或當(dāng)?shù)劁N售。
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