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如何讓你的HPLC數(shù)據(jù)質(zhì)量及重現(xiàn)性臻于完美,？
在日常檢測中為了獲得高質(zhì)量的數(shù)據(jù),，HPLC系統(tǒng)必須能同時提供可靠和具有可重現(xiàn)性的實驗結(jié)果,。下面小編就帶大家來看下液相常規(guī)應(yīng)用的日常注意事項和建議,。
01 試劑質(zhì)量
梯度洗脫比較容易在柱頭端累積A和B溶劑中的非極性雜質(zhì),，會在隨后的梯度過程中逐漸釋放這些雜質(zhì),。這些雜質(zhì)有可能在空白樣品和實際樣品的測試過程中出現(xiàn)。出于這個原因我們有必要在進行梯度實驗的時候使用HPLC級別的試劑,。低質(zhì)量的試劑可能適用于等度洗脫,，但是在梯度洗脫中，即便是最微不足道的雜質(zhì)也可能會造成測試異常的問題,。為了獲得最佳的實驗結(jié)果,，我們應(yīng)該確保在所有的HPLC實驗中只使用HPLC級別的試劑,。
水性試劑和緩沖液應(yīng)該經(jīng)常更換，這樣可以避免微生物生長而造成的污染,，水中的雜質(zhì)尤其會造成很多問題,。
02 系統(tǒng)的清潔
和試劑的質(zhì)量一樣重要，保持儀器清潔有助于減少鬼峰的出現(xiàn),，建議勤沖儀器,。如果遇到其他問題，如液體溢出,、漏液和其他潛在的污染源都應(yīng)該及時得到清理,。
03 除氣
雖然一些HPLC系統(tǒng)在流動相沒有除氣的情況下也可以運行，但是采用除氣后的溶劑會使所有系統(tǒng)的運行都變得更可靠,。殘存的氣泡和溶劑中氣體溢出的現(xiàn)象,，都可以通過對溶劑的除氣而大量避免。
另外,，HPLC系統(tǒng)中也會有殘存氣體,，每天都沖洗泵和溶劑的入口管線，不失為一個好主意,。我們可以通過開啟purge閥和以較高的流速（例如5mL/min）對泵進行幾分鐘的沖洗來移除泵和管線內(nèi)的氣泡,。
04 專用的色譜柱
每個分析方法都應(yīng)該有一根專用色譜柱。在不同的方法之間共用一根柱子并不是一個好主意,，因為一個方法中無關(guān)緊要的色譜峰可能會變成第二種方法中的干擾峰,。樣品成分可能會導(dǎo)致色譜柱的填料選擇性發(fā)生改變，或者其中一個方法造成柱子的退化,。
05 平衡
在每次實驗之前,，柱子應(yīng)該恢復(fù)平衡到同樣的程度，為后續(xù)的分離實驗做好準(zhǔn)備,。wan全平衡對于梯度洗脫來說是十分必要的,。
06 初始進樣
如果在第一次進樣之前，進行幾次“初始”進樣,，那么一些方法就可以獲得更好的結(jié)果,。這些標(biāo)準(zhǔn)品或者模擬樣品的進樣，可以飽和色譜柱上緩慢平衡的活性部位,，因此可以獲得重現(xiàn)性更好的實驗結(jié)果,。初始進樣對于分離生化樣品更有用。有時候系統(tǒng)適用性進樣也可以用作初始進樣,。
07 忽略第一次進樣
因為一些方法要求使用初始進樣的程序,，而且第一次進樣的平衡狀態(tài)可能和隨后進樣的不一致；因此最好避免使用第一次進樣做定量分析。第二次和隨后的進樣比第一次進樣更加可靠,；在正式進樣之前展開的系統(tǒng)適用性試驗也能用于這個目的,。
08 系統(tǒng)適用性
很多在監(jiān)管部門（FDA、EPA,、OECD,、USP等）監(jiān)管下的方法都要求在分析樣品之前做一個系統(tǒng)適用性的測試。系統(tǒng)適用性有助于確認(rèn)設(shè)備和分析方法能夠產(chǎn)生可靠的實驗結(jié)果,。
系統(tǒng)適用性測試的要求各有不同,，所以相關(guān)人員應(yīng)該咨詢有關(guān)的法規(guī)指導(dǎo)來幫助選擇合適的測試方法，很多操作者使用保留時間和峰面積的重現(xiàn)性,、色譜峰的響應(yīng)（檢測敏感度）,、峰寬、色譜峰的拖尾,、分離度和柱壓,，這些其中一種或者綜合的方法，作為系統(tǒng)適用性測試的一部分,。
系統(tǒng)適用性的樣品可以是稀釋了的標(biāo)準(zhǔn)品,、萃取基質(zhì)中的模擬樣品或者一些被選用來展示系統(tǒng)性能的樣品。這里一個重要的原則是,，所選擇的系統(tǒng)適用性樣品必須可以用來測試方法中的操作是否能達(dá)到所期望的目的,。無論是否需要進行系統(tǒng)適用性測試，在常規(guī)分析之前做一次這樣的測試不失為一個明智的選擇,，哪怕就只是注射一個標(biāo)準(zhǔn)品看看保留時間和峰大小是否和預(yù)期一樣,。
09 標(biāo)準(zhǔn)品和校正品
對于定量分析來說，就是用未知樣品的響應(yīng)和已知濃度響應(yīng)作對比,。標(biāo)準(zhǔn)品的濃度范圍,、重復(fù)測試的次數(shù)、注射的順序取決于具體的實驗?zāi)康?。既可以采?strong style="margin: 0px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important;">外標(biāo)也可以采用內(nèi)標(biāo),。在任何情況下至少應(yīng)該在分析未知樣品之前進樣一次標(biāo)準(zhǔn)品，來確保在樣品進樣之前,，這個分析方法是正常工作的,。