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正相色譜和反相色譜的區(qū)別,、適用范圍
高效液相色譜法（HPLC）因其選擇性高、靈敏度高,、分析速度快,，已成為現(xiàn)代分離測試的重要手段。色譜柱作為高效液相分離系統(tǒng)中的重要環(huán)節(jié),，色譜柱的類型決定色譜系統(tǒng)的性質(zhì),，色譜柱的粒徑和長度影響分析時間和分析效率。
在液相色譜分析中,，使用較多的分離模式是正相色譜分離模式和反相色譜分離模式,，正相色譜和反相色譜怎么區(qū)分，適用范圍是哪些,，今天小編就和大家聊一聊,。
01 正相色譜
正相色譜（NPC）是采用極性固定相（如帶有二醇基、氨基,、和氰基的固定相及硅膠等）,，流動相通常使用比鍵合相極性小的非極性或弱極性有機溶劑，如烴類溶劑,，或其中加入一定量的極性溶劑（如氯仿,、醇、四氫呋喃,、乙腈等）,，以調(diào)節(jié)流動相的洗脫強度。是一種根據(jù)目標(biāo)物的極性差異將其分開的液相色譜技術(shù),。
劃重點：正相色譜=固定相極性>流動相極性
一般認(rèn)為正相色譜的分離機制屬于分配色譜,。
● 在正相色譜中，樣品分子與載體基質(zhì)的硅醇基團發(fā)生特異的極性相互作用,，與固定相產(chǎn)生強極性相互作用的極性樣品分子比較難被洗脫,，在柱內(nèi)停留比較長的時間。
● 反之,，極性較弱或非極性分子與硅膠之間產(chǎn)生相對較弱的相互作用,，比較容易被洗脫，因而在柱內(nèi)停留的時間較短,。組分的分配比K值,，隨其極性的增加而增大，但隨流動相中極性溶劑的極性增大（或濃度增大）而降低,。
● 同時,，固定相的極性越大，組分的保留值越大,。
因此,，正相色譜可以根據(jù)目標(biāo)物的極性差別而達(dá)到分離目的,。
在正相色譜分離中，可通過薄層色譜法（TLC）選擇合適的流動相,。
正相色譜常用的四種固定相,，極性大小順序是：
硅膠>氨基>二醇基>氰基
正相色譜的適用范圍：
1）適合用于分離異構(gòu)體；
2）適用于絕不溶于水的化合物,；
3）適用于分離在反相色譜中不保留或極性較強的化合物,，比如生物堿、核苷酸類,、有機酸等,。
02 反相色譜
反相色譜（RPC）是指利用非極性的反相介質(zhì)為固定相，極性有機溶劑,、水溶液為流動相,，根據(jù)溶質(zhì)極性(疏水性)的差別進(jìn)行溶質(zhì)分離與純化的洗脫色譜法。
● 反相色譜的固定相大多是在硅膠表面鍵合疏水基團,，基于樣品中的不同組分和疏水基團之間疏水作用的不同而分離,。
● 在生物大分子分離中，多采用離子強度較低的酸性水溶液,，添加一定量乙腈,、異丙醇或甲醇等與水互溶的有機溶劑作為流動相。
● 樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分最先被沖洗出,，而極性弱的組分會在色譜柱保留更強,，后出峰。
劃重點：反相色譜=固定相極性<流動相極性
反相色譜常用的固定相種類有：
C18,、C8,、C4、C3,、C1,、苯基、C30,、PFP等。
反相色譜主要應(yīng)用于相對分子質(zhì)量低于5000,，特別是1000以下的弱極性和非極性小分子物質(zhì)的分析和純化,，如蛋白質(zhì)、肽,、氨基酸,、核酸、甾類,、脂類,、脂肪酸,、糖類、植物堿等含有非極性基團的各種物質(zhì),。