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關(guān)于制備液相分離的目標,，必須要了解的小知識
想做制備液相，但無從下手,，
拿到了小試結(jié)果，可不知道怎么放大,，
制備結(jié)果不符合預(yù)期要求卻不知道原因,，
這是為什么呢？
那么,，我們一起來往下看吧……
大家都知道,，制備型（Prep）色譜是以分離、富集和純化為目的,，以供進一步使用,。
通常為了進行有效的制備型分離，需要了解如下信息：
1.組成
樣品大概有多少個組分；
分離的目標組分有哪些（一定要明確）,；
2.純度
目標組分的純度要求是多少,；
對于制備型分離，對產(chǎn)品通常都有一定的純度要求,，也就是說并不是所有的分離都要求產(chǎn)品純度達到100%,，目標組分只要能達到我們具體的科研或是生產(chǎn)的純度要求就可以了。如微量的天然產(chǎn)物將其富集到大約70%的含量就可以進行初步鑒定,；供核磁及紅外測試的樣品純度只要達到95%左右就可以達到要求,；做定量分析用的標準品其含量至少要在99%以上；而一些生物活性物和一些生物活性物質(zhì)只需要除去其中的有害成分,，并且它們的純度并不用含量來表示,，而是用活力這個概念。只有了解產(chǎn)品純度的要求,，我們才能在制備型分離中,，建立起合適的方法。
3.復雜性
干擾物質(zhì)有哪些（盡可能了解,，便于復雜樣品的前處理）,；
4.性質(zhì)
樣品的物理或化學性質(zhì)（化學結(jié)構(gòu)、溶解性,、酸堿性,、化合物的檢測方式）；
目標組分的物理或化學性質(zhì)（同上）,；
對于目標組分,，如果是未知化合物，則需要了解大致有哪些特征的官能團,，如羥基,、羧基、氨基,、苯環(huán),、含氮雜環(huán)等，最終的目的都是了解化合物的極性大?。╨ogP值）和化合物的酸堿性（pKa值）,。這兩個參數(shù)往往決定了在制備液相色譜方法開發(fā)中固定相和流動相的類型。
5.價值
原料是否易得,、是否昂貴,；
所分離的目標物價值又如何？
只有掌握了樣品的這些初步情況,，才能使我們后面分離方法的建立有的放矢,，選擇合適的固定相和流動相，挑選一只分析柱（如4.6mm*250的分析型柱子，使用10μm的制備級填料）進行方法摸索,，并進行優(yōu)化,。
優(yōu)化步驟可以簡單的歸納如下：
選擇最佳的高效液相色譜分離條件
在分析型的設(shè)備條件下
摸索制備型分離方法
放大到制備型的規(guī)模上
進行制備型分離
收集餾分
在分析型的液相色譜儀器上
檢測產(chǎn)品純度，
如果不符合要求,，重新在分析型
液相色譜儀器上改進分離條件
合并相同組分
如果有需要的話,，
可以再進一步提純產(chǎn)品
收集目標物
看到這，有的小伙伴可能有疑問了,，為什么不直接在制備柱上去摸索呢,？因為直接在制備柱上摸索條件，規(guī)模變大,，如果方法條件不合適,，沒有獲得希望的純度，會造成樣品和試劑的多種浪費,，時間長了還容易造成制備柱的損壞,。需要注意的是，依據(jù)分析柱上摸索的方法,，最好選擇與分析柱相同品牌的填料的制備柱,，以免摸索好的方法在制備柱上無法重現(xiàn)。
下圖為幾款月旭科技用于小試和中試的WelPackerDAC動態(tài)軸向壓縮柱產(chǎn)品,。
不同內(nèi)徑的制備柱都有自己載樣量范圍,。如果上樣量過小，則洗脫效率降低,；如果上樣量過高,，則樣品在柱內(nèi)過載，可能與雜質(zhì)無法得到有效分離即被直接洗脫流出,。這里需要說明一點的是,，由于大多數(shù)的制備型色譜都是在適量過載的情況下工作的，而在該條件下色譜柱的柱效是呈指數(shù)下降的,，對于制備色譜柱過分追求小粒徑填料是得不償失的,，如5μm粒徑填料的成本比10μm粒徑填料高好多。
制備色譜柱的使用壽命主要取決于柱子的質(zhì)量,、樣品的性質(zhì)和干凈程度,。對于高價值的DAC來講，延長柱子壽命是很重要的,。一般來說，DAC需要配套制備型在線過濾器防止顆粒物堵塞制備柱,。
下圖為幾款月旭科技常見的制備型在線過濾器,。
月旭科技提供專業(yè)的方法開發(fā)，提供量身定制整體制備色譜解決方案，以滿足復雜的探索和業(yè)務(wù)需求,，幫助您發(fā)現(xiàn)新方法來克服操作和數(shù)據(jù)挑戰(zhàn),。