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正相色譜，出峰漂移,，月旭帶你一探究竟
正相色譜是我們色譜分離中一種常用的分離模式,。其分離原理是基于固定相的極性大于流動(dòng)相，通過(guò)吸附作用,，實(shí)現(xiàn)不同極性物質(zhì)之間的分離,。正相色譜的優(yōu)勢(shì)是可用于分離反相色譜不保留或極性較強(qiáng)的化合物，且適用于絕不溶于水的物質(zhì)分離,。
但是正相色譜也有困擾我們的難題,。經(jīng)常會(huì)有老師在使用正相色譜柱時(shí)出現(xiàn)出峰保留時(shí)間漂移的情況,，有些是使用的正相柱子，樣品出峰不斷地有前移的趨勢(shì),，有些是新買的正相柱子分離樣品保留時(shí)間和原有的舊柱子不一致等,。
這到底是怎么回事呢，出現(xiàn)這類保留時(shí)間漂移的問(wèn)題又該如何解決呢,？今天小旭就帶大家一探究竟,。
首先我們簡(jiǎn)單介紹下正相色譜
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? 定義：
固定相的極性大于流動(dòng)相，基于固液吸附的原理,，分離不同極性的樣品,。
? 洗脫順序：
極性低的物質(zhì)先被洗脫出來(lái)。流動(dòng)相的極性越強(qiáng),，洗脫能力也越強(qiáng),。
? 常見(jiàn)的正相色譜柱有：
硅膠柱，二醇基柱,，氨基柱,，氰基柱。
? 常用的流動(dòng)相：
主要試劑：烷烴（戊烷,，己烷,，庚烷，辛烷）,，芳香烴（苯,，甲苯，二甲苯）,，二氯甲烷,，四氯化碳。
輔助試劑：甲基-t-丁基醚（MTBE）,，yi醚,，四氫呋喃（THF），乙酸乙酯,，乙腈,，丙酮等。
正相色譜的優(yōu)勢(shì)是可用于分離反相色譜中不保留或極性較強(qiáng)的化合物,，且適用于絕不溶于水的物質(zhì)分離,，還可用于拆分異構(gòu)體。但正相色譜中,，卻易出現(xiàn)保留時(shí)間漂移的情況,。這究竟是什么原因呢？
原來(lái)正相色譜柱的固定相，特別是硅膠柱中未改性的裸硅膠,，其中的硅醇基的極性特別強(qiáng),，其對(duì)流動(dòng)相中甚至是實(shí)驗(yàn)環(huán)境中的水分含量非常敏感。而由于正相色譜中固定相的水分含量常常是個(gè)影響選擇性的關(guān)鍵參數(shù),，流動(dòng)相中的水分含量通常影響保留時(shí)間和分離度,。我們知道大部分溶劑都含有小部分的溶解水，比如正己烷在20℃下,，其水分含量是0.0111%w/w,。因此正相色譜中出現(xiàn)保留時(shí)間波動(dòng)較大的問(wèn)題，大多可歸因于固定相或流動(dòng)相中水分含量的變化,，而填料可能還是完好的,。
那么正相色譜中，出現(xiàn)這種固定相或者流動(dòng)相中的水分含量影響物質(zhì)保留時(shí)間的問(wèn)題,，該如何解決呢,？
小旭給大家分享兩個(gè)解決方法：
1、去除固定相上的水分
用含2.5%二甲氧基丙烷（dimethoxypropane）和2.5%冰醋酸的正己烷沖洗色譜柱30個(gè)柱體積,；
2,、使用水分含量可控的流動(dòng)相（比如：用水半飽和）
半飽和流動(dòng)相配置方式：將無(wú)水的非極性流動(dòng)相分成兩半；其中一半中加入一定量水,，并混勻攪拌約一小時(shí),，靜置分層后，將多余的水相全部除去,；將兩部分非極性流動(dòng)相重新混合在一起就配成了“半飽和"流動(dòng)相,。
快來(lái)看一個(gè)案例吧~
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? 售后案例背景
客戶新買的Topsil®（拓譜）Silica硅膠柱，在做一個(gè)老項(xiàng)目時(shí),，目標(biāo)化合物的保留時(shí)間出現(xiàn)了漂移,。同時(shí)對(duì)比舊柱子上目標(biāo)化合物的保留時(shí)間是在10min左右，而新柱子的目標(biāo)化合物的保留時(shí)間卻出現(xiàn)在了20min左右,。
色譜條件：
色譜柱：月旭Topsil® Silica（4.6×250mm,，5μm)。
流動(dòng)相：乙酸乙酯/正己烷/甲醇/正丙醇=60/40/2/1,；
檢測(cè)波長(zhǎng)：256nm；
柱溫：30℃,；
流速：1.0mL/min,；
進(jìn)樣量：100μL。
? 售后排查
月旭實(shí)驗(yàn)室對(duì)該項(xiàng)目進(jìn)行了驗(yàn)證,，發(fā)現(xiàn)的確在新柱子上目標(biāo)化合物的保留時(shí)間與客戶實(shí)驗(yàn)室的做樣結(jié)果一致,，在20min左右。
繼而月旭實(shí)驗(yàn)室對(duì)該方法流動(dòng)相中的主要試劑乙酸乙酯和正己烷進(jìn)行了水半飽和的操作,，使用水半飽和的流動(dòng)相重復(fù)了實(shí)驗(yàn),，樣品中目標(biāo)物的保留時(shí)間穩(wěn)定在了14min左右,，與客戶實(shí)驗(yàn)室用舊柱子做樣的保留時(shí)間基本一致。如下圖,。
通過(guò)月旭實(shí)驗(yàn)室的排查驗(yàn)證,，流動(dòng)相用水半飽和的方法，wan美解決了客戶在應(yīng)用正相色譜柱時(shí)出現(xiàn)目標(biāo)峰保留時(shí)間漂移的問(wèn)題,。
我們回訪客戶后,，還有彩蛋哦~
月旭正相色譜柱家族中有多系列、多種不同的鍵合相和多種規(guī)格供您選擇,。