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液相色譜分析流動(dòng)相中酸的選擇
磷酸、醋酸以及液相分析中常用到的酸（常見(jiàn)的還比如甲酸,，三氟yi酸等）,，他們的主要區(qū)別和選擇在于：
各自的酸性不同
磷酸的酸性比醋酸強(qiáng)，就是說(shuō),，磷酸可以把流動(dòng)相的pH值調(diào)到更低,。
紫外本底
有些酸有紫外本底，如甲酸,，乙酸,；有些沒(méi)有，如磷酸,。這樣,，在使用較低波長(zhǎng)檢測(cè)的方法時(shí)，就要考慮使用紫外本底小的酸,。冰醋酸在短波長(zhǎng)檢測(cè)下應(yīng)該慎用。
揮發(fā)性
有些酸是揮發(fā)性酸,，如甲酸,，乙酸，三氟yi酸等,；有些不揮發(fā),，如磷酸。使用不揮發(fā)酸,，流動(dòng)相的pH相對(duì)穩(wěn)定,，而揮發(fā)性酸可能隨時(shí)間造成流動(dòng)相pH緩慢改變。但是,，不揮發(fā)酸的不揮發(fā)性,，限制了它們?cè)谝嘿|(zhì)聯(lián)用時(shí)候的使用,。
離子強(qiáng)度
酸的離子強(qiáng)度不同，離子強(qiáng)度在很多情況下影響被分析物的解離和性質(zhì),，造成保留和峰型的改變,，通常離子強(qiáng)度為： 三氟yi酸>磷酸＞甲酸>乙酸。離子強(qiáng)度很高的酸,，通常會(huì)對(duì)液質(zhì)聯(lián)用產(chǎn)生強(qiáng)烈的抑制,，如三氟yi酸，幾乎可以讓負(fù)模式掃描信號(hào)全部被抑制,。
實(shí)例：甘草酸銨含量測(cè)定液相色譜分析,，結(jié)構(gòu)式：
方案一
使用初始方法濃度36.5%醋酸進(jìn)行柱子篩選：
1）條件為：甲醇：醋酸：水=78：0.3：22，柱溫30,，流速1mL/min,，
Ultimate® LP-C18 (4.6*250mm，5μm),，效果圖：
分析：此條件下基本分離,，但雜質(zhì)靠近主峰。
2）改變流動(dòng)相比例為甲醇：醋酸：水=75：0.3：25,，柱溫30,，流速1mL/min，Ultimate® LP-C18（4.6*250mm,，5μm),，效果圖：
分析: 主峰包含雜質(zhì)峰，分離度降低,。
3）保持原流動(dòng)相比例,，改變柱溫為25度，效果圖：
分析：此條件下分離度>1.5,，雜質(zhì)距離主峰較遠(yuǎn),。
4）使用同款色譜柱重現(xiàn)，效果圖：
分析：柱間分離情況及保留時(shí)間有差異,。
方案二
1）使用濃度99.5%的冰醋酸,，條件為：甲醇：冰醋酸：水=78：0.3：22，柱溫40,，流速1mL/min,，篩選zui 優(yōu)柱子月旭Topsil® C18（4.6*250mm, 5μm），效果圖：
分析：此條件下分離度仍不夠,。
2）改變流動(dòng)相比例為甲醇：冰醋酸：水=72：0.3：28,，柱溫40，流速1mL/min,，Topsil® C18（4.6*250mm,，5μm）,，效果圖：
3）改變柱溫為30，流動(dòng)相比例為甲醇：冰醋酸：水=72：0.3：28,，流速1mL/min,，Topsil® C18（4.6*250mm，5μm）,，效果圖：
分析：分離度>1.5,，達(dá)到要求。
4）多針重現(xiàn),，效果圖：
分析：保留時(shí)間較小差異,，分離度良好。
結(jié)論：使用36.5%醋酸的流動(dòng)相體系時(shí),，在合格的色譜柱條件下,，選擇4支重現(xiàn)，保留時(shí)間差異大,?？蓮囊韵陆嵌确治觯?/p>
1）該物質(zhì)本身就是一個(gè)兩性離子，有弱酸和弱堿離子,，在此條件下,，流動(dòng)相本身的緩沖作用很有限。
2）流動(dòng)相的pH在4-5之間,，這時(shí)候在反相C18中硅羥基的解離狀態(tài)是zui活躍的時(shí)候（硅羥基的pKa在4.2至4.5之間）,，物質(zhì)對(duì)填料狀態(tài)以及柱子之間的差異很敏感，體現(xiàn)在用不同支的色譜柱差異大,。在檢測(cè)甘草及其制品中的該物質(zhì)時(shí),，均出現(xiàn)過(guò)這樣的現(xiàn)象。
3）醋酸屬揮發(fā)性酸,，在使用36.5%乙酸和99.5%冰乙酸時(shí),，等量的變化在兩種流動(dòng)相體系中的影響程度不同，引起色譜結(jié)果差異性不同,。