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中國藥典、美國藥典對色譜條件的可調(diào)范圍規(guī)定
所謂藥典方法,，顧名思義,，藥典專論所收載的方法。在參考藥典方法進行色譜分析與方法開發(fā)過程中,，因實驗室條件不同導致*按照藥典方法無法進行可靠的分析,。我們應了解到：藥典方法考慮到各個實驗室的差異,，有一定的可調(diào)范圍。
下面我們具體來探討一下這個問題吧!
01
中國藥典2020規(guī)定
0512高效液相色譜法規(guī)定如下：
品種正文項下規(guī)定的色譜條件（參數(shù)）除填充劑種類,、流動相組分,、檢測器類型不得改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑與長度,、填充劑粒徑,、流動相流速、流動相組分比例,、柱溫,、進樣量、檢測器靈敏度等,，均可適當改變,，以達到系統(tǒng)適用性試驗的要求。
調(diào)整流動相組分比例時：
當小比例組分的百分比例X小于33%時,，允許改變范圍為0.7X?1.3X,；
當X大于33%時，允許改變范圍為X—10%?X+10%,。
由上文可知,，中國藥典專論方法除填充劑種類、流動相組分（比例調(diào)整在規(guī)定范圍內(nèi)）,、檢測器類型不得改變外,，其他條件改變了，還是認為是藥典方法,。
但中國藥典沒有規(guī)定方法確認之說,，所以，即使是中國藥典方法,，也是應該按分析方法驗證的相關規(guī)定進行全套的方法驗證,。
02
美國藥典規(guī)定
USP43<621>CHROMATOGRAPHY規(guī)定如下：
為符合系統(tǒng)適用性的要求而調(diào)整的操作條件是允許的,，除非專論項下另有規(guī)定,。下述為所列的最大的可調(diào)范圍，應該按分析方法驗證的相關規(guī)定進行全套的方法驗證,。多條件的調(diào)整,，將對系統(tǒng)性能產(chǎn)生累積影響，實施前需仔細考慮,。
01
流動相緩沖液的pH（HPLC）：±0.2單位以內(nèi)或規(guī)定范圍以內(nèi)調(diào)節(jié),，適用梯度及等度。
02
流動相緩沖液鹽濃度（HPLC）：±10%（pH允許情況下）,，適用梯度及等度,。
03
流動相中組分比例（HPLC）：組分比例≤50%的組分可以相對調(diào)節(jié)±30%,，但是任意一組分比例的調(diào)節(jié)不應超過±10%（相對于總的流動相），含三組分的流動相的調(diào)節(jié)可以分組分進行,，含雙組分的流動相的調(diào)節(jié)可在最小的組分進行,。
雙組分調(diào)節(jié)實例：例如流動相50：50，其中一組分50%的30%是15%,，但是它超過了占總體比例±10%的規(guī)定,，所以這個流動相比例的調(diào)節(jié)范圍應以±10%為限，可以在不超過40：60~60：40的范圍之間調(diào)節(jié),。再例如流動相比例為2:98,，其中小組分2%的30%是0.6%，這個值不超過占總體比例±10%的規(guī)定,，此流動相的比例可以在不超過1.4：98.6~2.6：97.4的范圍之間調(diào)節(jié),。
三組分調(diào)節(jié)實例：流動相60：35：5，它的次組分35%的30%是10.5%,，但是它超過了占總體比例±10%的規(guī)定,，所以這個流動相比例中的次組分的調(diào)節(jié)范圍應以±10%為限。對于最小組分5%的30%是1.5%,?？梢栽诓怀^50：45：5~70：25：5或58.5：35：6.5~61.5：35：3.5的范圍之間調(diào)節(jié)。
04
紫外檢測器的波長（HPLC）：專論中規(guī)定的檢測波長不允許改變,，檢測器供應商的程序或另一個驗證程序來說明,，波長檢測誤差，最多不得超過±3nm,。
05
固定相：
色譜柱長度（GC）：可以在±70%范圍內(nèi)調(diào)節(jié),。
色譜柱長度（HPLC）：見粒徑項下。
色譜柱內(nèi)徑（HPLC）：如果線速度保持恒定,，可以調(diào)整,。見HPLC流速。
色譜柱內(nèi)徑（GC）：最大可調(diào)整至±50%,。
膜厚（毛細管柱GC）：最大可在?50%至100%調(diào)整,。
06
粒徑(HPLC)：等度洗脫：粒徑和柱長均可以修改，但柱長（L）與粒徑（dp）的比值（L/dp）恒定或在規(guī)定柱長與粒徑的比值的-25%~+50%范圍內(nèi),?；蛘撸▽τ趯⒘６日{(diào)節(jié)應用于表面多孔顆粒時），其它柱長（L）和粒度（dp）的柱子可以使用,，但理論塔板數(shù)（N）應在規(guī)定柱的-25%~+50%范圍內(nèi),。如果調(diào)節(jié)導致更高的理論塔板數(shù)時應注意，這樣將產(chǎn)生更小的峰體積，應通過縮小額外柱外峰拓寬的因素調(diào)整,，例如儀器的管路,、檢測池的體積、采樣速率和進樣體積,。當專論中未規(guī)定粒度時,，該比值應采用規(guī)定柱的最大粒度計算。
粒徑(GC)：如果色譜圖的符合系統(tǒng)適用性要求以及粒徑范圍比相同,，粒度大小可以從大變小或從小變大,，粒徑范圍比的定義是最大粒度直徑除以最小粒度直徑。
07
流速（GC）：流速可以最大在±50%調(diào)整,。
流速(HPLC)：當粒度改變時,，流速也許需要調(diào)整，因為為達到相同的性能,，小粒度的柱子需要更高的線速度（測量通過較少塔板高度）,，流速、柱內(nèi)徑,、粒度通過下面公式換算,。
F2=F1×[（dc22×dp1）/（dc12×dp2）]
對于等度洗脫，如果粒度從≥3μm變化到＜3μm時,，將增加線速度（通過調(diào)整流速）,，使柱效不下跌20%以上，相同地,，如果粒度從＜3μm變化到≥3μm時,，應減少線速度（流速）來避免柱效降低20%以上。梯度洗脫時,，流速,、柱內(nèi)徑、粒度將不允許調(diào)整,。另外,，流速可以在±50%調(diào)整（只適用于等度洗脫）。