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背景

葉黃素,、玉米黃質(zhì)、α-胡蘿卜素,、β-胡蘿卜素和番茄紅素是天然植物性食品中Z為常見的5種類胡蘿卜素類營養(yǎng)物質(zhì),，具有維生素A原活性、抗氧化,、參與細胞傳遞,、免疫功能調(diào)節(jié)與促進、保護皮膚免于紫外線傷害和抑制黃褐斑生成等諸多生理保健功效,。

但這5種類胡蘿卜素類營養(yǎng)物質(zhì)的液相色譜同時分離測定一直比較困難,，原因是這5種類胡蘿卜素類營養(yǎng)物質(zhì)之間的極性差異比較大，葉黃素和玉米黃質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中有兩個羥基,，極性較強,，在反相液相色譜柱（如C18等）上的保留力較弱，而α-胡蘿卜素,、β-胡蘿卜素和番茄紅素是烴類物質(zhì),，僅由碳和氫兩種原子構(gòu)成，無任何極性官能基團,，極性極弱,，在反相液相色譜柱（如C18等）上的保留力*；另外,，更為重要是葉黃素和玉米黃質(zhì)之間,，以及α-胡蘿卜素和β-胡蘿卜素之間,，兩兩互為同分異構(gòu)體，相互間僅是一個碳-碳雙鍵的位置差異,，液相分離難度大（分子結(jié)構(gòu)詳見附錄A,，特征吸收光譜圖詳見附錄B）。

本應用案例采用月旭科技公司生產(chǎn)的C30反相高效液相色譜柱,、兩元梯度洗脫,，實現(xiàn)了單次高效液相色譜檢測對葉黃素、玉米黃質(zhì),、α-胡蘿卜素,、β-胡蘿卜素和番茄紅素這5種類胡蘿卜素類營養(yǎng)物質(zhì)的分離檢測，且單次高效液相色譜檢測費時為35分鐘,。

高效液相色譜檢測條件

1 儀器設備

Welch 高效液相色譜儀,，WiSys5000，配備二級管陣列檢測器,；

2 液相色譜柱

分析柱：Ultimate XB-C30色譜柱,，4.6mm×250mm, 5μm；

保護柱：Ultimate XB-C30,，4.6mm×10mm, 5μm,；

3 流動相

A相：甲醇:乙腈=1:1；B相：乙酸乙酯,；

4 梯度洗脫程序

5 流速

1.0mL/min,；

6 檢測波長

476nm；

7 柱溫

30℃,；

8 進樣體積

20μL,。

高效液相分離色譜圖

從高效液相檢測的色譜圖看，不僅單次檢測,，35分鐘內(nèi)實現(xiàn)同時分離檢測葉黃素,、玉米黃質(zhì)、α-胡蘿卜素,、β-胡蘿卜素和番茄紅素這5種類胡蘿卜素類營養(yǎng)物質(zhì),，而且互為同分異構(gòu)體的葉黃素和玉米黃質(zhì)之間，以及α-胡蘿卜素和β-胡蘿卜素之間,，都基本實現(xiàn)了基線分離,。

相關色譜耗材 

附錄A：5種類胡蘿卜素天然營養(yǎng)物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)

附錄A：5種類胡蘿卜素天然營養(yǎng)物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)