C18液相色譜柱的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器,、泵、進(jìn)樣器,、色譜柱,、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成,。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),,樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi),,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),,在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測(cè)器時(shí),,樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來,。
C18液相色譜柱的流動(dòng)相配制:
a、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力,,并且保證樣品不會(huì)在色譜柱內(nèi)析出或長時(shí)間留在色譜柱內(nèi),;
b、流動(dòng)相不與樣品發(fā)生反應(yīng),;
c,、流動(dòng)相粘度盡量小,使樣品得到高效分離的同時(shí)降低柱壓,,延長色譜柱壽命,;
d、流動(dòng)相沸點(diǎn)不能太低,,避免有氣泡產(chǎn)生,,影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)行;
e,、流動(dòng)相要保證現(xiàn)配現(xiàn)用,,不能儲(chǔ)存太久,避免流動(dòng)相生成雜質(zhì)微生物影響檢測(cè),;
f,、流動(dòng)相使用前先脫氣。
C18液相色譜柱污染再生技術(shù):
色譜柱污染后,,可以用合適的溶劑沖洗,,使柱效再生。
常規(guī)的再生洗滌方法是:分別用甲醇,、三氯甲烷,、甲醇/水各60mL依次通過色譜柱,再用100%甲醇60mL平衡色譜柱后封存,,柱效將恢復(fù)正常,。必要時(shí),根據(jù)柱污染性質(zhì)(如有機(jī)污染,、鹽類污染等),,采用0.05mol/LH2SO4、0.5mol/LH3PO4或0.1mol/LEDTA鈉鹽沖洗,,然后再用水沖洗,,用100%甲醇平衡色譜柱后封存。對(duì)于嚴(yán)重污染的色譜柱,,可采用水,、甲醇、乙烷依次沖洗后,按順序倒過來再?zèng)_洗1次,,每次所用溶劑60mL,,不接檢測(cè)器,用甲醇平衡色譜柱封存,。
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