小伙伴們大家好，在前期已經(jīng)介紹了色譜柱老化過程中,，我們需要注意哪些細節(jié),？那么，今天我們就詳細地聊一聊溫度對氣相分析的影響,，在氣相的恒溫分析和程序升溫中,，該如何來選擇并進行方法優(yōu)化？
不管是程序升溫還是恒溫分析,，終目的都是將樣品中的多種化合物達到基線分離,，并呈現(xiàn)峰形尖銳，符合高斯分布的色譜峰,。分離度在色譜分析中是衡量柱效至關重要的參數(shù),，那么影響分離度的因素有哪些呢？首先,，我們先了解一下分離度方程,。
01 分離度方程
上述公式中Rs代表分離度，N代表色譜柱柱效,，α代表選擇性,，K是指保留因子,。
保留因子K：對化合物來說，溫度對保留時間的影響主要表現(xiàn)為：柱溫越高,，保留越弱,，保留時間越短；柱溫降低,，保留增強,，保留時間延長。一般而言,，柱溫每上升30℃,，保留時間就會降低50%。
選擇性α：柱溫降低有利于改善分離度,。
柱效N：柱溫對色譜柱柱效也有一定的影響,，一般情況下，柱溫升高,，保留時間縮短，峰寬變小,，柱效升高,。
02 氣相分析方法中的恒溫分析和程序升溫分析
在恒溫分析中，氣相色譜柱的柱溫是不變的,，主要適合分析沸點差異不大,、保留性質(zhì)相近的化合物。
但是,，當待測組分之間保留性質(zhì)相差較大時,，晚出峰的化合物色譜峰會出現(xiàn)峰寬較寬、峰形變差,、靈敏度不高等各種問題,；較早流出的化合物色譜峰又會呈現(xiàn)分離度不好的現(xiàn)象。針對此種情況就需要使用程序升溫方法,。
在程序升溫方法中,，色譜柱起始溫度較低，有利于改善較早流出色譜峰的分離度,。然后隨著柱溫上升,，并在方法z高溫度下保持一段時間，可以讓較晚出峰化合物的保留時間前移,，提高工作效率,。
03 升溫程序的優(yōu)化
一般情況下，可以采用下面的升溫梯度,，來作為方法優(yōu)化的起始,。
■ 起始溫度不要太高,，建議設置為比實驗室室溫高15℃即可
■ 升溫速率建議設置為10℃/min
■ z高溫度設置為色譜柱恒溫溫度上限以下20℃左右，然后保持10min,，觀察色譜圖中待測組分的分離狀態(tài)
■ 再根據(jù)得到的色譜圖對升溫條件進行進一步優(yōu)化
1,、升溫方法的選擇
在色譜圖中，如果待測組分（所有化合物）出峰時間的“窗口”小于整個程序升溫時間的1/4,，那么就建議采用恒溫分析,。此時，恒溫溫度建議設置為比后一個峰的出峰溫度低45℃,，然后再以10℃左右上下調(diào)整,，直到達到所需的分離度。
另外,，若是所有化合物出峰時間的“窗口”大于整個程序升溫時間的1/4,，或者采用恒溫分析方法無法達到滿意的分離度，此種情況就需要使用程序升溫的分析方法,。
2,、程序升溫中，起始溫度的設定
■ 若是不分流進樣,，一般將初始溫度設置為低于溶劑沸點10-20℃,，并維持1min。目的就是降低溶劑效應,，因為不分流進樣時,，樣品膨化體積較大，載氣流速相對來說較小,，氣化后的樣品不能瞬間進入色譜柱,。將初始溫度設置為低于溶劑沸點10-20℃，并維持1min,，有利于溶劑冷凝聚焦,，獲得更窄的峰展寬，提高分離度,。
■ 若是分流進樣,，相對來說襯管里的載氣流速很快，待測組分能夠很快進入色譜柱,。所以不需要對樣品進行冷凝聚焦,，初始溫度的設置沒有特殊要求。
此外,，有時候還可以通過稍微降低初始溫度和延長保持時間,，來提高較早流出色譜峰的分離度。
3,、升溫速率的設定
一般情況下,，升溫速率越快,，整體色譜峰的保留時間縮短，出峰也就越快,，可以提高工作效率,，但同時也會降低色譜峰的分離度。所以我們是希望用短的分析時間,，來獲得z佳的分離效果,。推薦的升溫速率可以用以上公式來計算：T0為死時間，指的是從進樣開始,，不被固定相保留的組分出現(xiàn)峰大值時的時間,。
4、恒溫平臺的設定
當我們采用同一個升溫速率,，有些化合物的色譜峰還是達不到滿意的分離度,，可以在這部分化合物出峰溫度以下45℃左右設置一個恒溫平臺，在此溫度下維持2-5min,，然后繼續(xù)升溫,。若是待測組分種類比較多，為了達到較好的分離度,，可能需要設置多個恒溫平臺,。
5、結(jié)束溫度的設定
關于結(jié)束溫度,，一般設置為比后一個色譜峰出峰溫度高20℃左右,。若是樣品基質(zhì)比較復雜或者不分流進樣,，需要把結(jié)束溫度設定的稍高一些,，目的是對氣相柱進行高溫烘烤，除去可能存在的高沸點雜質(zhì),。但同時需要注意設定的溫度不能超過色譜柱使用溫度上限,。
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