液相色譜柱的分類(按色譜固定相基質分)
1.硅膠基質：
1.1反相色譜柱：
反相色譜填料常是以硅膠為基礎，表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相,。反相色譜所使用的流動相極性較強,，通常為水，緩沖液與甲醇,，已腈等混合物,。樣品流出色譜柱的順序是極性較強組合先被沖出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留,。常用的反相填料有C18(ODS),、C8(MOS)、C4(B),、C6H5(Phenyl)等,。
1.2正相色譜：
正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica),，以及其他具有極性官能團，如胺基團(NH2,APS)和氰基團(CN,，CPS)的鍵合相填料,。由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他團的極性較強，因此,，分離的次序是依據樣品中的各組份的極性大小,，即極性強弱的組份先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,，如：正乙烷(Hexane),,二氯甲烷(Methylene Chloride)等,。
1.3離子交換色譜柱：
以磺化交聯(lián)強陰/陽離子鍵合硅膠色譜柱，常用規(guī)格：強陰離子色譜柱(SAX),，強陽離子交換色譜柱(SCX)
2.聚合物基質：
聚合物調料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,，其主要優(yōu)點是在PH值為1～14均可使用。相對與硅膠基質的C18填料,，這類填料具有更強的疏水性,；大孔的聚合物填料對蛋白質等樣品的分離非常有效。現在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料,，色譜柱柱效較低,。
所有聚合物基質在流動相發(fā)生變化時都會出現膨脹或收縮。用于HPLC的高交聯(lián)度聚合物填料,，其膨脹和收縮要有限制,。溶劑或小分子容易滲入聚合物基質中，因為小分子在聚合物基質中的傳質比在陶瓷性基質中慢,，所以造成小分子在這種基質中柱效低,。對于大分子像蛋白質或合成的高聚物，聚合物基質的效能比得上陶瓷性基質,。因此,，聚合物基質廣泛用于分離大分子物質。
色譜柱的選擇
液相色譜儀基質的選擇大致遵循以下法則,，硅膠基質的填料被用于大部分的HPLC分析,，尤其是小分子量的被分析物，聚合物填料用于大分子量的被分析物質,，主要用來制成分子排阻和離子交換柱,。
色譜柱在使用前，建議進行柱的性能測試,，并將結果保存起來,，作為今后評價柱性能變化的參考,。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是較佳的條件),，只有這樣,，測得的結果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品,、流動相,、柱溫等條件的差異而有所不同。
色譜柱的維護
1. 色譜柱的平衡
反相色譜柱由工廠測試后是保存在乙腈/水中的,。新柱應先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱,。請一定確保您分析樣品所使用的流動相和乙腈/水互溶。每天用足夠的時間以流動相來平衡色譜柱,，您就會在處理問題方面獲得大的“補償“,。
2. 色譜柱的再生
長期使用的色譜柱，往往柱效會下降(柱子的理論塔板數減低),?？梢詫ιV柱進行再生，在有條件的實驗室應使用一個廉價的泵進行柱子的再生,。建議用來沖洗柱子的溶劑體積,。
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