單克隆抗體（簡(jiǎn)稱(chēng)單抗）廣泛用于疾病的診斷,、預(yù)防和治療,。自1986年shou個(gè)單抗藥物上市以來(lái)，已有近40種單抗藥物上市,，還有300多種單抗處于臨床研究中,。單抗藥物已成為發(fā)展zui快的藥物領(lǐng)域之一。
在單抗藥物的生產(chǎn)過(guò)程中,，對(duì)分離純化工藝的效率和成本的要求非常高,，單抗的分離純化成本通常可占其生產(chǎn)成本的50-70%,。Protein A親和介質(zhì)是抗體分離純化關(guān)鍵的材料,，其性能和成本決定了單抗產(chǎn)品的純度和收率和成本。
目前,，絕大多數(shù)的抗體IgG分子純化使用Protein A親和層析,。Protein A是金黃色葡萄球菌表面的蛋白，分子量42kDa,，有5個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域可以結(jié)合IgG的Fc片段,，具有很強(qiáng)的特異性親和力，每個(gè)Protein A分子至少可以結(jié)合兩個(gè)抗體IgG分子,。
Protein A Tanrose 4FF
Protein A Tanrose 4FF 是用于分離和純化單克隆抗體,、多克隆抗體或 Fc-融合標(biāo)簽的通用性親和層析介質(zhì)，ProteinA 有五個(gè)IgG結(jié)合區(qū)域和一些未知功能的區(qū)域,，重組protein A去除了與白蛋白及細(xì)胞表面結(jié)合位點(diǎn),，只含有五個(gè) IgG 結(jié)合區(qū)域，減少了非特異性吸附,。
Protein A Tanrose 4FF是以高度交聯(lián)的4%瓊脂糖凝膠為基質(zhì),，可以在相對(duì)較高的流速下進(jìn)行單克隆抗體和多克隆抗體的純化，被工業(yè)客戶(hù)普遍接受。
緩沖液準(zhǔn)備
所用水和緩沖液在使用之前建議用 0.22μm 或 0.45μm 濾膜過(guò)濾,。
平衡/ 洗雜液: 20mM Na? HPO? , 0.15M NaCl, pH7.0,；
洗脫液: 0.1M 甘氨酸，pH3.0,；
中和液：1M Tris-HCl,，pH8.5。
樣品純化
Protein A Tanrose 4FF 裝填好后,，可以用各種常規(guī)的中低壓色譜系統(tǒng)。
?? 將泵管道中注滿(mǎn)去離子水,。去掉上塞子,，將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中，打開(kāi)下出口,，將預(yù)裝柱接到色譜系統(tǒng)中,，并旋緊。
?? 用 3-5 倍柱體積的去離子水沖洗出儲(chǔ)存緩沖液,。
?? 使用至少 5 倍柱床體積的平衡液平衡色譜柱,。
?? 利用泵或樣品環(huán)上樣。注:樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少,，也會(huì)導(dǎo)致層析柱很大的反壓,。上樣量不要超過(guò)柱子的結(jié)合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓,，使得進(jìn)樣器更難使用,。
?? 用洗雜液沖洗柱子，直到紫外吸收達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線(xiàn)（一般至少 10-15 個(gè)柱體積）,。
?? 使用 5-10 倍柱體積的洗脫液洗脫,，收集洗脫液，即目的蛋白組分,。洗脫組分需要立即調(diào)成中性,，一般建議使用洗脫組分體積 1/10 的中和液進(jìn)行中和。
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