在整個(gè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的各項(xiàng)檢查中,，有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)占據(jù)了大半“江山”，同時(shí),，在整個(gè)質(zhì)量研究的分析方法研究過(guò)程當(dāng)中,，有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)也占據(jù)了很大的一部分精力。在快的時(shí)間內(nèi)設(shè)計(jì)或者選擇一個(gè)“穩(wěn)健”的有關(guān)物質(zhì)方法,，成為項(xiàng)目完成與否的關(guān)鍵,。
對(duì)于暫未有藥典收載的藥物，通常會(huì)從整個(gè)雜質(zhì)譜的結(jié)構(gòu)分析開始,。對(duì)于結(jié)構(gòu)的分析,，又要往前翻到本系列的篇簡(jiǎn)略質(zhì)量研究案例（一）點(diǎn)擊藍(lán)字回看，根據(jù)文中所述,，去各網(wǎng)站或者數(shù)據(jù)庫(kù)中查詢并歸納各個(gè)雜質(zhì)的性質(zhì),，根據(jù)性質(zhì)來(lái)選擇波長(zhǎng)、色譜柱,、流動(dòng)相等,。對(duì)于波長(zhǎng)的選擇，在有關(guān)物質(zhì)方法的檢查中,，與含量中波長(zhǎng)的選擇依據(jù)有差異,。對(duì)于含量分析方法來(lái)說(shuō)，更關(guān)心的是主成分的吸收,，而對(duì)于有關(guān)物質(zhì)分析來(lái)說(shuō),，更關(guān)心的是各個(gè)雜質(zhì)的穩(wěn)定檢出。雜質(zhì)限度較低，波長(zhǎng)選擇的差異容易影響到各個(gè)雜質(zhì)的限度,。而流動(dòng)相和固定相（色譜柱）等色譜條件的選擇,，則會(huì)影響到方法的穩(wěn)健性。一個(gè)穩(wěn)健的分析方法,，會(huì)讓我們的分析方法驗(yàn)證,、分析方法轉(zhuǎn)移等工作更加順暢。一個(gè)耐用性較差的方法,，不止會(huì)在整個(gè)研究過(guò)程當(dāng)中虐得我們si去活來(lái),，還會(huì)影響研究數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
當(dāng)然,，對(duì)于我們今天所需要討論的氟哌啶醇有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)來(lái)說(shuō),，因?yàn)橐延懈鲊?guó)藥典收載，故一般還是從藥典方法開始進(jìn)行篩選,。
目前,，中國(guó)藥典、美國(guó)藥典,、歐洲藥典,、英國(guó)藥典及日本藥典均收載了其有關(guān)物質(zhì)檢查分析方法，各藥典對(duì)比如下：
對(duì)比四國(guó)藥典,，均采用C18的色譜柱,，EP還特別標(biāo)注了堿去活封尾色譜柱。從本系列的節(jié)開始,，我們就知道，氟哌啶醇是一個(gè)弱堿。在我們接觸液相色譜開始,，相信絕大多數(shù)人都知道，硅膠基質(zhì)的色譜柱,，容易封尾不*而存在一些弱酸性的硅羥基活性位點(diǎn)（Si-OH）,，這些活性位點(diǎn)會(huì)增強(qiáng)對(duì)離子化后的堿性化合物的保留而造成拖尾,。當(dāng)然,，堿性化合物的拖尾不止這一點(diǎn),，還包括過(guò)載引起的拖尾,。對(duì)于液相色譜拖尾問(wèn)題,，小編在本公眾號(hào)之前的一個(gè)系列中有詳細(xì)闡述,。（奉送直達(dá)車：峰型那些事（一））。除中國(guó)藥典未標(biāo)注色譜柱規(guī)格外,，其他三國(guó)藥典所用的色譜柱從規(guī)格上看,，柱效基本一致。流動(dòng)相體系的選擇,，則是分離策略的選擇,。
ChP2015所用的磷酸鹽緩沖體系,，pH剛好在其緩沖范圍外，但是,，其磷酸鹽濃度較常規(guī)使用的高（50mmol/L）,，應(yīng)該能彌補(bǔ)這一點(diǎn)，另外,，ChP2015的供試品濃度并不高（1mg/ml）,，也彌補(bǔ)了流動(dòng)相緩沖能力不夠的缺點(diǎn),。但從主成分氟哌啶醇來(lái)說(shuō),，再降低一些流動(dòng)相pH,，比如用pH=3.0,，可能更加合適,。當(dāng)然,，我們一直所說(shuō)的,，單一個(gè)組分無(wú)所謂方法,，對(duì)于有關(guān)物質(zhì)來(lái)說(shuō),，更多的考慮是其他組分，而不單單是主成分,。對(duì)于氟哌啶醇這個(gè)項(xiàng)目,，小編純屬紙上談兵,，并未深入，而實(shí)際當(dāng)中具體的選擇,，還是根據(jù)具體的工藝來(lái)實(shí)現(xiàn),。
對(duì)于JP17,，其選擇的緩沖鹽體系剛好在檸檬酸鹽的緩沖范圍內(nèi)（pKa1=2.1~4.1）,，但是,，其選擇的波長(zhǎng)（220nm）又超出了檸檬酸鹽的截止波長(zhǎng)（230nm）,，超出了截止波長(zhǎng)就意味著本底有吸收,，可能會(huì)影響定量限的濃度水平,。另外,，JP17還加入了一個(gè)小編很不喜歡的離子對(duì)-十二烷基硫酸鈉（SDS）,。SDS作為陽(yáng)離子對(duì)試劑,，一方面可以增加氟哌啶醇的保留,，另一方面,，則可以改善峰型。但是SDS的使用存在一些缺陷,，市售的SDS質(zhì)量差異非常大，換個(gè)品牌或者換個(gè)批次,，會(huì)發(fā)生無(wú)法重現(xiàn)方法的問(wèn)題,。這是因?yàn)槭惺跾DS純度差異較大的以及組成差異的關(guān)系。以SDS為離子對(duì)試劑帶來(lái)的另一方面的困擾是方法耐用性較差,，使用的過(guò)程當(dāng)中,，必須量取流動(dòng)相的各組分,，確保每次配制的流動(dòng)相比例一致。否則,，微小的緩沖鹽-有機(jī)相比例差異可能會(huì)造成較大的保留時(shí)間差異,。
USP40\EP9.0\BP2019方法一致，均為緩沖液-乙腈體系,。在常規(guī)的使用中,，四丁基硫酸氫銨在大多數(shù)場(chǎng)合均作為離子對(duì)試劑出現(xiàn)。但在USP40\EP9.0\BP2019方法中,，其并不是作為離子對(duì)存在,。折算下濃度，其在流動(dòng)相中的濃度也不低（50mmol/L）,，一方面,，作為增加離子強(qiáng)度的緩沖鹽，該濃度下溶液的pH應(yīng)為2~3,。另一方面,，更重要的，是作為與待測(cè)組分相同的離子組分存在于流動(dòng)相中,，形成離子氛，減少氟哌啶醇與固定相間的相互作用,，減少拖尾,。四丁基硫酸氫銨作為一個(gè)陽(yáng)離子,，也能與固定相中的活性硅羥基作用，同樣能從另一方面減少拖尾,。由此可見USP40\EP9.0\BP2019在多方面改善了有關(guān)物質(zhì)的峰形問(wèn)題,，過(guò)載問(wèn)題（峰形問(wèn)題）,，當(dāng)然，過(guò)載后的峰形較差,，峰寬較寬,，會(huì)影響主峰附近的雜質(zhì)峰分離,，進(jìn)而影響各雜質(zhì)的定量限濃度,。由于有了上述的一些措施,，USP40\EP9.0\BP2019的供試品濃度能使用較高的濃度（10mg/ml）,，較高的供試品濃度意味著更低的檢出限。
稀釋劑的選擇,，氟哌啶醇在分子狀態(tài)其疏水性并不低,，故USP40\EP9.0\BP2019選擇了純甲醇來(lái)作為稀釋劑,。而ChP2015和JP17的流動(dòng)相均為酸性緩沖液和高比例的有機(jī)相，且其供試品濃度較低,，用流動(dòng)相作為稀釋劑既方便又可以滿足稀釋的能力,。
相較于ChP2015和JP17的等度，USP40\EP9.0\BP2019的梯度方法現(xiàn)階段更易被接受。一般認(rèn)為梯度方法能有更高的區(qū)分力和區(qū)分范圍,，較等度方法更科學(xué)合理,。
至于波長(zhǎng)及流速的選擇，不同的流動(dòng)相體系也會(huì)影響UV曲線的表現(xiàn)以及組分的保留情況,，至于如何選擇,，跟所需分離的有關(guān)物質(zhì)有關(guān),。綜合考慮，選擇you的組合,。
至于供試品濃度及進(jìn)樣量,，前述段落中已有所表述。
至于計(jì)算方式是選擇外標(biāo)法還是主成分自身對(duì)照法,，亦或是主成分外標(biāo)法,，還是主成分外標(biāo)/自身稀釋對(duì)照外標(biāo)加校正因子法,，取決于產(chǎn)品的特性，從成本角度,，方便角度,，科學(xué)合理角度綜合考慮,，選擇即合理又方便的方式。
限度的考察，條即來(lái)自于ICH的限度要求,。根據(jù)每日大劑量，推算產(chǎn)品的單雜限度,。對(duì)于藥典中已列明的已知雜質(zhì),，可參照藥典標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂,。終定入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的雜質(zhì)并不是越多越好,。越多的雜質(zhì)表明后續(xù)測(cè)試愈加繁瑣，而我們的目標(biāo)，是在盡量少的操作中,，控制風(fēng)險(xiǎn),，使得產(chǎn)品更加安全可靠。
有沒(méi)有小伙伴要問(wèn)小編：難道USP40\EP9.0\BP2019就*了嗎,？USP40\EP9.0\BP2019所使用的四丁基硫酸氫銨會(huì)吸附在色譜柱上,，可能會(huì)使該色譜柱改性而不便于其他產(chǎn)品的使用。另外,，四丁基硫酸氫銨的使用,，可能會(huì)減少色譜柱的壽命。對(duì)的,，成本的增加也是方法的缺陷哦,！~我記得在前述的某篇文章中曾提到，沒(méi)有的方法,，只有適合的方法,。
ChP2015及JP17,，在限度以及各方面均能滿足的情況下,，也算一個(gè)合適的方法。至于如何挑選,，一定是綜合各方面的情況后綜合選擇的,。至于方法是否在各方面均能滿足，需要通過(guò)分析方法學(xué)驗(yàn)證來(lái)確證,。分析方法學(xué)驗(yàn)證如何做,，且聽下回分解！~
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
10
立即詢價(jià)
您提交后,，專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)