C18液相色譜柱在使用過程中,,須注意以下事項
1、C18液相色譜柱在使用前,,須先用甲醇或乙腈試劑以20倍柱體積低流速沖洗,,作用是使固定相能充分潤濕、碳鏈舒展*,,使色譜柱的性能達到更好狀態(tài),。具體操作是,將配制好65%的乙腈/水沖洗后,,把色譜柱進口端連接在色譜儀上,,出口端放空(不可連上檢測器,以免污染了檢測器),,以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速將色譜柱中的清稀溶液吹干,,過20分鐘后再接上檢測器,以1.0ml/min的流速,,繼續(xù)沖洗2~8小時,;
2、液相色譜儀檢測分析樣品完畢后,,須沖洗c18反相液相色譜柱,。尤其是流動相中含有酸或鹽時,需將c18反相液相色譜柱中的酸或鹽沖洗干凈,,通常建議用10%甲醇水沖洗20倍柱體積,;
3、若C18液相色譜柱處于長期閑置狀態(tài)時,,要將色譜柱*沖洗,,建議沖洗3-4小時以上,后保存在純有機試劑或高比例的有機試劑溶液中,;
4,、由于c18反相液相色譜柱的固定相疏水性較強,在使用過程中盡量不要使用高水相條件,,若水相比例過高易引起固定相疏水塌陷,,引起柱效迅速下降,甚至造成不可逆的負面影響,;由于碳載量高,,表現(xiàn)尤為明顯,建議使用過程中水相比例不超過90%,;
5,、C18液相色譜柱壓力升高,、柱性能下降:通常為色譜柱被污染,對色譜柱進行再生處理可恢復部分柱效,;
6、C18液相色譜柱壓力驟升:通常由鹽析出或篩板堵塞引起,,若是鹽析出,,用10%甲醇水低流速沖洗至壓力恢復即可;若判斷并非鹽析出,,以純甲醇或10%甲醇水為流動相反沖色譜柱(將色譜柱反接,,不接檢測器),若反沖半小時仍無效果則說明反沖無效,,需尋找其他原因,。
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