EZ ECL Femto化學(xué)發(fā)光液（飛克級）

1. 取出印記膜，加入合適的封閉液在溫室下孵育20~60 min,，同時振蕩,，以封閉膜上非特異性蛋白結(jié)合位點。

2. 將膜從封閉液中取出,，與一抗工作液在溫室孵育1 h,，同時振蕩；或在28℃孵育過夜,，不振蕩,。

3. 將足量的洗滌緩沖液加至膜上，保證緩沖液將膜*覆蓋,。振蕩孵育≥5 min,，更換洗滌緩沖液并重復(fù)該步驟4~6次,。增加洗滌緩沖液體積，洗滌次數(shù)和洗滌時間有助于降低背景信號,。【注】：①孵育前,，膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會提高洗滌效率。②按前文建議的HRP標(biāo)記二抗稀釋度非常重要的,。

4. 將HRP標(biāo)記的二抗工作液與膜在溫室孵育1 h,，同時振蕩。

5. 重復(fù)步驟3,，以除去未結(jié)合的HRP標(biāo)記二抗,。【注】：膜與HRP標(biāo)記二抗孵育后必須進行*洗滌。

6. 將A溶液與B液等比例混合,，制備成工作液,。每cm²膜使用0.01~0.1 mL工作液，工作液可以在溫室下穩(wěn)定8 h,。
   【注】：暴露于日光或其他強光下可能損害工作液,，為獲得最佳結(jié)果，請將此工作液保存在琥珀色瓶中光,；實驗室的常見照明不會損害工作液,。

7. 將印記膜在工作液中孵育5 min。從工作液中取出印記膜,，并置于一個塑料片或清潔的塑料紙（膜）中，用一張吸水紙吸除多余的液體,，并從印記和塑料紙之間小心地壓出氣泡,。

8. 將包在塑料紙（膜）中的印記膜置于膠片暗盒中，蛋白質(zhì)面朝上,，除適用于膠片曝光的燈（如紅色安全燈）之外,，關(guān)閉所有的燈。
   【注】：①膠片必須在曝光期間保持干燥,；②確保將多余的底物從膜和塑料紙上*去除,；③在整個膠片處理期間，使用手套,。

9. 將X光膠片置于膜的上面,。建議第一次曝光60 s。之后可調(diào)整曝光時間以達到最佳結(jié)果,?；瘜W(xué)發(fā)光反應(yīng)在底物孵育后的前5~30 min期間是強烈的。這一反應(yīng)可以持續(xù)幾個小時,，但強度會隨時間下降,，如有底物孵育后較長時間后曝光,，曝光時間可能需要延長以獲得較強信號。如果使用磷光存儲成像設(shè)備（如Bio-Rad的分子成像儀系統(tǒng)）或CCD照相機可能需要較長的曝光時間,。
   【注】：膠片與膜之間的任何移動可能在膠片上造成人為的非特異信號,。

10. 使用合適的顯影劑和定影劑對膠片進行顯影。如果信號太強,，則縮短曝光時間或?qū)⒂∮浤みM行剝離并降低抗體濃度重新檢測,。

1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域,。

2. 為獲得最佳效果，必須優(yōu)化該系統(tǒng)的全部組分,，包括樣品量,、一抗和二抗?jié)舛纫约澳ず头忾]試劑的類型。

3. 使用本產(chǎn)品比使用沉淀比色HRP底物檢測所需的抗體濃度低,。為優(yōu)化抗體濃度,，請進行一次系統(tǒng)的點印跡分析。

4. 沒有一種封閉試劑對所有系統(tǒng)而言都是最佳的,，所以為每一個免疫印跡檢測系統(tǒng)找到最合適的封閉緩沖液非常必需,。封閉試劑有可能與抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)，導(dǎo)致出現(xiàn)非特異性信號,。封閉緩沖液同時也會影響系統(tǒng)的靈敏性,。當(dāng)從一種底物轉(zhuǎn)換為另一種底物時，有時會出現(xiàn)信號衰減或背景增加的現(xiàn)象,，原因可能是封閉緩沖液不適合新的檢測系統(tǒng),。

5. 使用親和素/生*素檢測系統(tǒng)時，避免使用牛奶作為封閉試劑,，因為牛奶中含有不定量的內(nèi)源性生*素,，會導(dǎo)致高背景信號。

6. 保證洗滌緩沖液,、封閉緩沖液,、抗體溶液和底物工作液的使用體積，以確保在整個實驗過程中印跡膜*被液體覆蓋,，避免膜變干,。增大封閉緩沖液及洗滌緩沖液的使用量可以降低非特異性的信號。

7. 為獲得最佳效果,，在孵育步驟請使用搖床,。

8. 將Tween20(終濃度0.05~0.1%)加入封閉緩沖液和稀釋的抗體溶液，以降低非特異信號。使用高品質(zhì)的產(chǎn)品,，如去污劑,。它保存在安瓿中，過氧化物和其他雜質(zhì)含量很低,。

9. 不要使用疊氮鈉作為緩沖液的防腐劑,。疊氮鈉是HRP的抑制。

10. 避免手與膜直接接觸,，實驗過程應(yīng)戴手套或使用干凈的鑷子,。

11. 所有設(shè)備必須清潔且不沾染外來物質(zhì)。金屬器械（如剪刀）不得具有可見的銹跡,。銹跡可能導(dǎo)致斑點形成和高背景,。

12. 底物工作液在室溫下可穩(wěn)定8 h。日光或任何其他強光下可能損害底物,，為獲得最佳結(jié)果,，將底物工作液保存在琥珀色瓶中，并避免長期暴漏在任何強光下,，短時間暴漏于實驗室常規(guī)照明不會損害該工作液,。