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AN54L038/AN54L039-Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏)
  • AN54L038/AN54L039-Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏)

貨物所在地:上海上海市

地: 上海

更新時(shí)間:2025-01-17 18:41:39

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Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏)不同于常規(guī)的基于吸光度的測(cè)量,這款試劑盒可以區(qū)分dsDNA、ssDNA或RNA,有選擇性地檢測(cè)dsDNA(見圖1)。與傳統(tǒng)DNA定量方法相比,,該產(chǎn)品具有檢測(cè)范圍廣、高靈敏度,、高特異性等優(yōu)點(diǎn),。

Pikogreen dsDNA定量試劑盒 (超敏)

產(chǎn)品描述
  Pikogreen dsDNA 定量試劑盒(Pikogreen HighSensitivity dsDNA Quantitation Kit不同于常規(guī)的基于吸光度的測(cè)量這款試劑盒可以區(qū)分dsDNA,、ssDNARNA,,有選擇性地檢測(cè)dsDNA(見圖1)。與傳統(tǒng)DNA定量方法相比,,該產(chǎn)品具有檢測(cè)范圍廣,、高靈敏度、高特異性等優(yōu)點(diǎn),。試劑盒主要包含Pikogreen High Sensitivity dsDNA Quantitation Buffer, Enhancer solution以及pre-diluted dsDNA Standards三個(gè)組分,,可以在200 uL體系內(nèi)定量0.2~100 ng的dsDNA(見圖2)。此外,,試劑盒還可以將其他污染物的影響降低至最小,,可以耐受常規(guī)污染物例如蛋白質(zhì),鹽,,有機(jī)溶劑和洗滌劑等(見表1),,試劑盒不具有細(xì)胞膜通透性,,沒有細(xì)胞毒性和誘發(fā)突變性,,對(duì)人體安全無(wú)害。
訂購(gòu)信息

產(chǎn)品名稱貨號(hào)規(guī)格
Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏)AN54L038200 assays
Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏)AN54L0391000 assays

產(chǎn)品組分

組分AN54L038AN54L039
A: Pikogreen High Sensitivity dsDNA Quantitation Solution50 mL250 mL
B: Pikogreen High Sensitivity dsDNA Enhancer, 100×0.5 mL2.5 mL
C: dsDNA Standards 0 , 0.5, 1, 2 ,4 ,6, 8 and 10 ng/uL dsDNA from calf thymus每組 0.1 mL8組)每組 0.5 mL8組)


運(yùn)輸與保存
藍(lán)冰運(yùn)輸,。4℃避光保存,,有效期24個(gè)月。
使用方法

  1. 使用前,,將產(chǎn)品從儲(chǔ)存條件下取出恢復(fù)至室溫,。如果100XEnchancer儲(chǔ)存液出現(xiàn)沉淀,可37℃水浴溶解,。每個(gè)組分應(yīng)充分震蕩或渦旋混勻,、離心,以免造成不必要的試劑損耗,。

  2. 每個(gè)待測(cè)樣品對(duì)應(yīng)200 μL的Pikogreen工作液,。對(duì)于一個(gè)96孔板,吸取200 μL 100X Enchancer,加入到20 mL Quantitation Solution 中,,渦旋混勻,,配置成Pikogreen工作液,為得到最佳結(jié)果,,工作液應(yīng)在1 h內(nèi)使用完畢,。如果將工作液重新儲(chǔ)存并在24 h內(nèi)使用,結(jié)果的準(zhǔn)確性會(huì)有輕微損失,。儲(chǔ)存過(guò)程中,,增強(qiáng)液可能會(huì)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象,可以通過(guò)渦旋震蕩使其重懸,。

  3. 對(duì)于每個(gè)樣品,,吸取200 μL的工作液至黑色的96孔板微孔中。為確保結(jié)果精確可靠,,建議每個(gè)測(cè)試樣品和DNA標(biāo)樣分別做平行的3個(gè)復(fù)孔,,此過(guò)程也可以使用有精確量程的移液排槍進(jìn)行。黑色的檢測(cè)板可以減少各測(cè)試樣品間的熒光干擾,。

  4. 在96孔板微孔中,,每孔加入10 μL的dsDNA標(biāo)樣或未知樣品,并用移液器輕輕混勻,。

  5. 將微孔板室溫避光孵育5~10 min,,為得到最佳結(jié)果,孵育結(jié)束后,,應(yīng)立即讀取檢測(cè)板,。也可以在6 h內(nèi)讀取數(shù)據(jù),但結(jié)果的精確性會(huì)有輕微損失,。

  6. 使用激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)在485 nm和530 nm處的酶標(biāo)儀測(cè)量熒光值,。

  7. 制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算檢測(cè)樣品的DNA濃度(見圖2),。
    】:圖2標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供參考,,您可以根據(jù)實(shí)際測(cè)得的數(shù)據(jù)自制標(biāo)準(zhǔn)曲線,從而求算樣品的濃度,。

圖1:使用Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量試劑盒檢測(cè)不同類型核酸得到的相對(duì)熒光強(qiáng)度


圖2:使用Pikogreen Hig Sensitivity dsDNA 定量試劑盒制作的calf thymus DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線(Ex/Em 485/530),,左上角插圖顯示了低濃度DNA樣本測(cè)定的曲線圖。

注意事項(xiàng)

  1. 對(duì)于要檢測(cè)的植物或動(dòng)物來(lái)源的DNA樣本,,小牛胸腺DNA(Calf thymus DNA )常常作為制作DNA標(biāo)樣的參照物,。因?yàn)?/span>Calf thymus DNA具有雙鏈結(jié)構(gòu)、高度聚合,,堿基分配均勻(AT含量58%,,GC42%),。如果檢測(cè)樣品的熒光值超過(guò)了標(biāo)準(zhǔn)曲線,那么需要將樣品做進(jìn)一步稀釋處理,。為了保持結(jié)果的一致性,,務(wù)必使每孔上樣量均等,且不含有其他高濃度的污染物,。
    2. Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量試劑盒可以測(cè)量范圍在0.2~100 ng的dsDNA,。對(duì)于一些不需要線性檢測(cè)的樣品試劑盒檢測(cè)范圍可以擴(kuò)展至200 ng,。如需檢測(cè)更低含量的樣品,,您可以將DNA標(biāo)樣用1×TE緩沖液作進(jìn)一步的稀釋,濃度可以稀釋到0.02 ng/μL,,然后按照常規(guī)程序每孔10 μL上樣,。
    3. 對(duì)于不同種類的檢測(cè)儀器,您可以優(yōu)化儀器設(shè)置,,以獲取最佳線性度,。一些可能會(huì)影響最終線性度和相對(duì)熒光強(qiáng)度的因素有:(1)激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)與帶寬(2)截止型濾波器(3)靈敏度設(shè)置(4)移液的準(zhǔn)確性(5)微孔板制造商。為了得到最佳結(jié)果,,請(qǐng)使用精確校準(zhǔn)的移液器和去RNA酶的槍頭,、試管以及檢測(cè)板。建議檢測(cè)時(shí)每個(gè)DNA標(biāo)樣和未知樣品都設(shè)定3個(gè)復(fù)孔,。如果檢測(cè)時(shí)不只一塊96孔板,,建議每塊96孔板都設(shè)定一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,盡量減少檢測(cè)板之間的誤差,。
    1:常見的DNA污染物對(duì) Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量試劑盒的影響

復(fù)合物初始濃度終濃度(200 μL結(jié)果
醋酸銨100 mM5 mMPass
醋酸鈉600 mM30 mMPass
氯化鈉200 mM10 mMPass
氯化鎂25 mM1.25 mMPass
苯*2 %0.1 %Pass
乙醇10 %0.5 %Pass
氯仿2 %0.1 %Pass
十二烷基硫酸鈉(SDS)0.2 %0.01 %Pass
Triton X-1000.2 %0.01 %Pass
牛血清白蛋白(BSA)200 mg/mL10 mg/mLPass*
dNTPs**2 mM100 μMPass
聚乙二醇40 %2 %Pass
瓊脂糖2 %0.1 %Pass

】:3dsDNA平行樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線,,分別在上述含有特定濃度污染物的條件下(初始濃度進(jìn)行檢測(cè),“Pass"指與沒有污染物的體系相比較,,實(shí)驗(yàn)結(jié)果變化范圍<20%,。所有樣品用Molecular DevicesGemini XS酶標(biāo)儀在485 nm處激發(fā),在530 nm處測(cè)熒光強(qiáng)度,?!?/span>Pass *"指由此條件測(cè)得的標(biāo)準(zhǔn)曲線有少許變動(dòng),。dNTPs**"指dATP, dCTP, dGTP, dTTP的混合物,。




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