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產(chǎn)品描述
　　消化法中常使用的酶有3種：胰*白酶、膠原酶以及透明質(zhì)酸酶,，透明質(zhì)酸酶多數(shù)情況下與胰*白酶或膠原酶聯(lián)合應用,。胰*白酶作用較強，容易造成平滑肌細胞損壞,，而膠原酶作用較緩和,，能消化細胞間質(zhì)中的膠原纖維以釋放細胞，對細胞損傷小,，是只此一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶,。
　　膠原酶(Collagenase)從溶組織梭菌（Clostridium histolyticum）提取的一種酶粗提物，也叫梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）,，不僅含有膠原酶,，還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶,、脂酶等,。這些成分分別能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白,，多糖和脂質(zhì)。該酶分離效果好,，即使有鈣、鎂離子存在仍有活性,，故可用PBS和含血清的培養(yǎng)液配制,，既操作簡便又可提高細胞成活率，終濃度200u/mL,，此酶消化作用緩和,，無需機械振蕩。
　　目前商業(yè)化提供的細菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異,，分為四種類型：膠原酶I型,，II型，III型和IV型,，在應用上有所偏向：(1)膠原酶I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶活力（包括膠原酶,、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶,、胰*白酶活性）,。通常用作上皮細胞、肝,、肺,、脂肪和腎上腺組織細胞的制備。(2)膠原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性,，通常用于心臟,、骨、肌肉,、胸腺和軟骨等組織來源細胞的制備,。(3)膠原酶III（Type III Collagenase）：含有較低的蛋白酶活性，常用于乳腺細胞的制備,。(4)膠原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低*酶活性,，通常用于胰島細胞的制備，或者需要維持受體完整性的細胞制備實驗,。

　　Collagenase, TypeⅡ膠原酶Ⅱ型操作簡便,，且與Washington LS00417X/LS004189/LS004188/LS004186等產(chǎn)品相比細胞成活率更高，詳見下文或咨詢銷售人員,。
訂購信息

保存方法
　　4℃保存,，保質(zhì)期一年。
使用方法
1.膠原酶儲存液的配制
向每管100 mg的膠原酶中加入100 μL的含Ca²⁺,、Mg²⁺的HBSS（Hank’s平*鹽溶液,，含Ca²⁺,、Mg²⁺），輕輕旋渦震蕩使其充分溶解,，制備成1 g/mL（即1000×）的儲存液,。然后用低蛋白結(jié)合性的0.22μm的濾膜過濾除菌，分裝成小份量,，然后于-20℃避光凍存,。
使用前于冰上解凍，避免反復凍融,。其用于組織和細胞分散的常用濃度為：0.5~2.5 mg/mL,，用于軟骨消化的常用濃度為1~2 mg/mL，需要根據(jù)特定的實驗條件或者參考相應的文獻資料確定所需的合適的濃度,。
2．組織的分離
（1）使用無菌shoushu刀或剪刀將組織切成3~4 mm大小的組織塊,。
（2）利用含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS洗滌組織塊數(shù)次,。
（3）加入足量的含Ca²⁺,、Mg²⁺的HBSS，使其浸沒組織塊,，并加入膠原酶至需要工作濃度,。
（4）于37℃孵育4~18 h。消化時使用水平搖床以及用3mM的CaCl2補充消化可以提高消化效率,。
（5）已分散開的細胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得,，收集備用。未*解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續(xù)孵育,。
（6）利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數(shù)次,。
（7）細胞培養(yǎng)液重懸上述細胞，利用自動細胞計數(shù)器或其他方法計算活細胞密度,。
（8）于細胞培養(yǎng)皿上利用合適細胞培養(yǎng)基接種細胞,。
3．器官灌注
（1）向37℃預熱的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS中加入膠原酶,，另添加3 mM的CaCl₂有助于提高分離效率,。
（2）按照已優(yōu)化的速率對相應的器官灌注膠原酶工作液。
（3）將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩,，從而將已解離的細胞或小片段組織塊與較大團塊分離開來,，未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于37℃進一步孵育。
（4）利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數(shù)次,。
（5）細胞培養(yǎng)液重懸上述細胞,，利用自動細胞計數(shù)器或其他方法計算活細胞密度。
（6）于細胞培養(yǎng)皿上利用合適細胞培養(yǎng)基接種細胞,。