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EZ Cell Transfection Reagent，EZ Trans 細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑（高效）

一,、產(chǎn)品描述

1.EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑作為新一代的轉(zhuǎn)染試劑,，其轉(zhuǎn)染原理是帶正電的陽離子聚合物與核酸中帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞,。

2.經(jīng)過李記生物的優(yōu)化處理,，本產(chǎn)品具有轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低,，操作簡單,，重復(fù)性好，適用范圍廣等特點,。

　　3.EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑與Thermo/ Lipo 2000/Invotrigen/ Lipofectamine 2000等產(chǎn)品相比,，操作更便捷，詳見使用方法,。

二,、訂購信息

三、保存方法

冰袋運輸,，4℃保存,，保質(zhì)期12個月。不可冷凍！

四,、使用方法（以 24 孔板為例,，其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請參考表1）

1. 接種細(xì)胞

對于貼壁細(xì)胞，轉(zhuǎn)染前18-24 h進(jìn)行鋪板（不含抗生素）,，使其在轉(zhuǎn)染時的密度大約在80%左右,。對于懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)染當(dāng)天,，配制EZ Trans-DNA復(fù)合物之前進(jìn)行鋪板,，每500 µL生長培養(yǎng)基中加入4~8×10⁵cells。  

【注】：培養(yǎng)液中的血清不影響轉(zhuǎn)染效率,。轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實驗條件影響,，建議初次使用時設(shè)置梯度進(jìn)行優(yōu)化合適的使用量。

2. 準(zhǔn)備EZ Trans-DNA復(fù)合物

⑴對于每孔細(xì)胞,，將1 μg質(zhì)粒DNA稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yǎng)基）,，混勻。

⑵對于每孔細(xì)胞,，將3 μL EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yǎng)基）,，輕輕混勻。

【注】：無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基是稀釋液,，不能使用含血清的培養(yǎng)基進(jìn)行DNA和EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑的稀釋,。因為EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過程不能含有血清。

（3）將稀釋好的EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中,，輕輕混勻,。

【注】：此混合的順序不能反向進(jìn)行。

（4）室溫放置10-15 min,，以形成EZ Trans-DNA復(fù)合物,。

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞

（1）將上述80 μL EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細(xì)胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動培養(yǎng)皿或輕微振蕩,，讓EZ Trans-DNA復(fù)合物分散均勻,。

（2）在37℃，5% CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)6-18 h,，去除含EZ Trans-DNA復(fù)合物的培養(yǎng)液,，更換新的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)至對轉(zhuǎn)入基因表達(dá)分析,。

【注】：篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,，轉(zhuǎn)染細(xì)胞24 h后，將細(xì)胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細(xì)胞稀釋10倍以上）,，在37℃,，5% CO₂培養(yǎng)箱中孵育24 h,，加入篩選培養(yǎng)基。在有轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下,，約 1～2周可篩選到耐藥性克隆,，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。

五,、注意事項

1. 質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高純度無內(nèi)毒素轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒,。通過260 nm光吸收測定DNA 濃度，260 nm / 280 nm比值確定 DNA 純度（比值應(yīng)該在1.8～2.0的范圍之內(nèi)）,。如有可能,，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。

2. 細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞,。確保細(xì)胞沒有被細(xì)菌,、真菌或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次,。建議使用GIBCO或者李記生物的胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞。

3. 細(xì)胞培養(yǎng)液要求： EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染,，并且轉(zhuǎn)染前不需要換培養(yǎng)基,。但是，制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時要求用無血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑,，因為血清會影響復(fù)合物的形成。確保細(xì)胞培養(yǎng)液沒有被細(xì)菌,、真菌或支原體污染,。轉(zhuǎn)染時培養(yǎng)液中不添加抗生素。

4. DNA濃度和EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑量的優(yōu)化：DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實驗條件影響,，初次使用應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑量以得到大的轉(zhuǎn)染效率,。使用者可嘗試每 1 μg DNA使用 1～4 μL體積EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例,，通常推薦是1:2~1:5,。

表1：不同培養(yǎng)體積對應(yīng)的待轉(zhuǎn)DNA、EZ Trans,、稀釋液用量

【注】：該表使用量僅供參考,，具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞類型及其他實驗條件進(jìn)行優(yōu)化。使用時DNA（μg）: EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑（μL）比值保持在1:2~1:5,。

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