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產(chǎn)品描述

信使核糖核酸（mRNA）在細(xì)胞質(zhì)中啟動蛋白質(zhì)翻譯,，不需要進(jìn)入細(xì)胞核,，可實現(xiàn)比DNA轉(zhuǎn)染更快的蛋白表達(dá)，且避免基因整合風(fēng)險,。

EZ Trans mRNA轉(zhuǎn)染試劑是一種結(jié)合了陽離子聚合物和脂質(zhì)體優(yōu)點的轉(zhuǎn)染試劑,，協(xié)同促進(jìn)轉(zhuǎn)染復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞，隨后在胞質(zhì)中釋放,，能夠在多種細(xì)胞類型中實現(xiàn)高效,、低毒的轉(zhuǎn)染效果。

訂購信息

運輸與保存

藍(lán)冰運輸,。4℃保存,，有效期 6 個月；-30℃至-10℃保存,，有效期12個月,。注：避免反復(fù)凍融。

使用方法（以 24 孔板為例,，其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請參考表 1）

1． 接種細(xì)胞

對于貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天,，將細(xì)胞按照每孔1-2x10^5個細(xì)胞的量進(jìn)行鋪板，使其在轉(zhuǎn)染時密度為60%-80% 為佳,。

對于懸浮細(xì)胞：轉(zhuǎn)染當(dāng)天,，配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物之前，用PBS清洗細(xì)胞1-2次,，用250 μL Opti-MEM I 減血清培養(yǎng)基 (無血清) 重懸細(xì)胞,，在24孔板中進(jìn)行細(xì)胞鋪板,，細(xì)胞密度為60-80%。

2． 準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染試劑-mRNA復(fù)合物

(1)  對于每孔細(xì)胞,，將 0.5 μg待轉(zhuǎn)染mRNA加入到1.5mL離心管中,，加入2 μL轉(zhuǎn)染試劑與mRNA 混合，室溫孵育3 min,。

(2)  往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清),，輕輕混勻，在室溫下靜置30 min,，形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物,。

(3)  30 min后，往上述復(fù)合物中加入250 μL Opti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清),，輕輕混勻,。

3． 轉(zhuǎn)染細(xì)胞

(1)  細(xì)胞用PBS清洗1-2次，將上述350µL轉(zhuǎn)染試劑-mRNA復(fù)合物加入每孔細(xì)胞,。

(2)  在 37℃,，5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)12 h，無需更換新的培養(yǎng)液,，之后即可檢測轉(zhuǎn)染效果,。若需更長時間轉(zhuǎn)染，可在轉(zhuǎn)染12 h后補(bǔ)充500 μL培養(yǎng)基 (含血清),，總體積達(dá)到 500μL,，即達(dá)到常規(guī)的培養(yǎng)皿使用培養(yǎng)液的量，12-36 h后再進(jìn)行檢測,。

注意事項

1.    本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域,。

2.    mRNA質(zhì)量：請務(wù)必使用高純度,、無菌,、無污染,、無內(nèi)毒素的優(yōu)質(zhì)mRNA?？梢酝ㄟ^對mRNA進(jìn)行加帽(相比于Cap0結(jié)構(gòu),，帶有Cap1 結(jié)構(gòu)的mRNA對于哺乳動物系統(tǒng)更適合)，使用N1-甲基-假尿苷修飾和添加poly(A)尾,，以增強(qiáng)mRNA的穩(wěn)定性和壽命,。

3.    整個實驗過程使用無RNA酶和無熱原性的材料，如離心管,、槍頭,、緩沖液,。

4.    細(xì)胞條件：細(xì)胞狀態(tài)會極大影響轉(zhuǎn)染效率，待轉(zhuǎn)染細(xì)胞應(yīng)處于良好生長狀態(tài),，建議使用生長處于指數(shù)期,、存活率大于90% 的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次,。

5.    細(xì)胞培養(yǎng)液要求：EZ Trans mRNA轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染實驗要求采用無血清轉(zhuǎn)染體系(推薦使用Opti-MEM減血清培養(yǎng)基)，因為血清會影響復(fù)合物的形成及mRNA轉(zhuǎn)染效率,。

6.    由于某些特殊培養(yǎng)基中的成分可能會抑制陽離子聚合物介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染,，因此建議測試這些培養(yǎng)基與本產(chǎn)品的相容性，以確保最佳轉(zhuǎn)染效果,。

7.    試劑用量的優(yōu)化：RNA 濃度和轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實驗條件影響,，初次使用應(yīng)優(yōu)化mRNA 濃度和轉(zhuǎn)染試劑用量以得到最大的轉(zhuǎn)染效率。通常情況下,，24孔板的推薦mRNA用量為0.2-1 μg,，轉(zhuǎn)染試劑推薦用量為2-4 μL。建議初次使用時,，可在推薦范圍內(nèi)進(jìn)行不同用量的預(yù)實驗,，以優(yōu)化轉(zhuǎn)染效果。

表 1：不同培養(yǎng)體積對應(yīng)的待轉(zhuǎn)mRNA,、 EZ Trans,、稀釋液用量

注：該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞類型及其他實驗條件進(jìn)行優(yōu)化,。a: 稀釋轉(zhuǎn)染試劑-mRNA復(fù)合物所需培養(yǎng)基的量,；b: 加入轉(zhuǎn)染試劑-mRNA復(fù)合物的培養(yǎng)基的量。

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本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域。