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AC25L434-外泌體分離試劑盒(SEC法)
  • AC25L434-外泌體分離試劑盒(SEC法)

貨物所在地:上海上海市

更新時間:2025-01-15 15:59:11

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外泌體分離試劑盒(SEC法)基于分子排阻色譜原理(SEC法),,通過分子大小差異實現(xiàn)外泌體分離,,具有操作簡便、高純度和高回收率的優(yōu)點,,特別適用于大體積樣本的外泌體分離,。分離的外泌體可用于 WB 分析、NTA 或納米流式粒徑分析,、電鏡檢測,、組學研究及細胞和動物實驗中的功能研究。本試劑盒常用于細胞培養(yǎng)上清,、尿液等大體積樣本,,也適用于血清、血漿等樣本,。

產(chǎn)品描述

本試劑盒基于分子排阻色譜原理(SEC法),,通過分子大小差異實現(xiàn)外泌體分離,具有操作簡便、高純度和高回收率的優(yōu)點,,特別適用于大體積樣本的外泌體分離,。分離的外泌體可用于 WB 分析、NTA 或納米流式粒徑分析,、電鏡檢測,、組學研究及細胞和動物實驗中的功能研究。本試劑盒常用于細胞培養(yǎng)上清,、尿液等大體積樣本,,也適用于血清、血漿等樣本,。

訂購信息

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

外泌體分離試劑盒(SEC法)

AC25L434

4T

產(chǎn)品組分

組分

4T

保存條件

A. Exosome Purification Column(10mL)

4個

4°C

B. Column Adapter(10mL)

4個

常溫

運輸與保存

常溫運輸,。組分A在4℃保存,組分B常溫保存,,有效期12個月,。

使用方法

自備儀器、試劑與耗材:高速冷凍離心機,、離心管,、超濾管(MWCO:50 kDa)、PBS(現(xiàn)配現(xiàn)用,,0.2um 過濾,,超聲或真空脫氣)、20%乙醇(現(xiàn)配現(xiàn)用,,0.2um 過濾,,超聲或真空脫氣)、純化柱固定器(自行購買或者合適的固定試管鐵架臺,,以避免操作過程中發(fā)生晃動)

1.    樣品預處理

(1)       去除細胞:將樣品在 4℃,、300g 離心 5 min,轉(zhuǎn)移上清至新離心管,;無細胞樣本可跳過此步驟,。

(2)       去除細胞及碎片:4℃、2,000g 離心 10 min,,轉(zhuǎn)移上清至新離心管,。

(3)       去除大體積顆粒:步驟 (2)得到的上清,在 4℃,、14,000g 下離心 30 min,,轉(zhuǎn)移上清至新離心管。

2.    純化柱預處理

(1)   將外泌體純化柱(Exosome Purification Column(10mL))安裝在純化柱固定器上,,下方放置廢液槽。讓純化柱在室溫(18-25℃)平衡至少 30 min;溫度過低或過高會影響分離效果,。

(2)   檢查純化柱下端是否充滿液體,,如無空氣可跳過此步驟;若有空氣,,將純化柱倒置,,打開下端密封帽,用移液器或注射器注入水或 20% 乙醇頂出空氣,,使密封帽中充滿液體后重新蓋上,,并放回固定器。

(3)   打開純化柱頂蓋,,再打開下端密封帽,,棄去封柱液(可倒掉或用移液器吸出),將純化柱適配器(Column Adapter (10 mL))連接到純化柱,,從頂部加入 2 倍柱體積(20 mL)PBS 進行平衡,,至下端無溶液流出。清洗過程中確保頂部篩板始終保持濕潤,。完成后,,蓋上底端密封帽,斷開適配器,,并加入 1 mL PBS 備用,。

注:

①    每次操作前應先打開純化柱上蓋,再打開下端密封帽,,以避免空氣進入,,影響分離效果。

②    分離過程中確保純化柱頂部篩板始終濕潤,,以保持最佳分離效果,。

③    向純化柱中加入大體積溶液時,可將適配器連接到純化柱,,將溶液加入到適配器中,。

④    PBS 建議新鮮配制并通過 0.2 μm 濾膜過濾,或使用商業(yè)的無菌 PBS 以防微生物或顆粒污染,。PBS使用前必須平衡至室溫,,以避免純化柱中出現(xiàn)氣泡影響分離效果。

3.    分離外泌體

(1)   樣品上樣:移除純化柱中的 PBS,,在上方加入 1 mL 樣本,;如樣本不足 1 mL,可用 PBS 補至 1 mL,,混勻后上樣,。取下純化柱底部密封帽,,待樣本全部進入純化柱后再加 PBS。

注:

①    如樣本體積超過 1 mL,,建議用 50 kDa 超濾管將樣本濃縮至 1 mL,,濃縮倍數(shù)不超過 20 倍(具體操作見超濾管使用說明書)。

②    對于高粘度樣本(如血漿,、血清,、高粘度胸腹水等),可取 0.5 mL 樣本用 PBS 稀釋至 1 mL,,混勻后上樣,。

③    待樣品進入篩板后再加入 PBS,以避免樣品被稀釋影響分離效果,。

(2)   外泌體分離:在純化柱下方放置 1.5 mL 離心管,,向上方加入 0.5 mL PBS,待下方收集到 0.5 mL 餾分后,,繼續(xù)加入 0.5 mL PBS,,并更換新的 1.5 mL 離心管收集。按流出順序標記各餾分管編號,。

(3)   外泌體收集:收集 4,、5、6,、7,、8 號餾分管以獲得外泌體,其中 5,、6,、7 號餾分管的外泌體濃度更高??芍苯訉κ占簻y定外泌體顆粒數(shù)和蛋白濃度,。

(4)   外泌體濃縮:測定外泌體顆粒濃度和蛋白濃度后,根據(jù)后續(xù)實驗需求,,可選擇是否進行濃縮,。如需濃縮,建議使用 MWCO 50 kDa 的超濾管,,在 4,000g 離心至所需體積即可,。

4.    純化柱維護

(1)   收集所有餾分后,將適配器連接至純化柱,,從頂部加入至少 2 倍柱體積(20 mL)PBS清洗純化柱,,至下方無溶液流出。

(2)   繼續(xù)加入 1.5 倍柱體積(15 mL)20% 乙醇清洗,,至下方無溶液流出,。

(3)   最后,,取下適配器,向純化柱中加入 3 mL 20% 乙醇封閉液,,安裝純化柱頂蓋,,并在密封帽中填滿 20% 乙醇,蓋到純化柱下端出口,,于 4℃直立保存。

注意事項

1. 本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用,,不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域。

2. 為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

3. 新購買或使用后的純化柱,上篩板和白色瓊脂糖微球之間可能會出現(xiàn)一定的空隙,,這是儲存和使用過程中凝膠沉降造成的,,并不影響純化柱的性能,將上篩板向下推至無空隙即可正常使用,。

4. 本試劑盒常用于細胞培養(yǎng)上清,、尿液等大體積樣本,也適用于血清,、血漿等樣本,。其他微量珍貴樣本,請向本公司技術(shù)人員咨詢,。

5. 純化柱保存在封閉液中,,封閉液為 20%乙醇。20%乙醇建議現(xiàn)配現(xiàn)用,,同時經(jīng) 0.2um 濾膜過濾,、超聲或真空脫氣,避免造成純化柱出現(xiàn)大量氣泡,,影響分離效果,。

6. 每次純化柱使用前需要使用無菌并平衡至室溫的 PBS 清洗。PBS建議現(xiàn)配現(xiàn)用,,同時經(jīng) 0.2um 濾膜過濾,、超聲或真空脫氣,避免造成純化柱出現(xiàn)大量氣泡,,影響分離效果,。

7. 純化柱中間不能有氣泡,使用前后需認真檢查,,避免影響實驗,。

8. 純化柱可以反復利用,,但是多次使用會影響效果,建議重復使用不超過5次,。

9. 當分離的外泌體進行 NGS 或者其他組學分析時,,為避免交叉污染,建議每個樣品使用一支新的純化柱,。

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本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用,,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域,。


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