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產(chǎn)品描述
RIPA (Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液，是一種經(jīng)典的動(dòng)物組織/細(xì)胞快速裂解液,，通過(guò)組合離子型去垢劑和非離子去污劑對(duì)組織細(xì)胞的消化作用使組織細(xì)胞崩解釋放出蛋白質(zhì),，對(duì)細(xì)胞膜、胞漿亞組分,、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用,。
李記生物 RIPA 裂解液(中) 不含 PMSF 組分; 適用于 PAGE、Western Blotting 和免疫沉淀(IP)的研究,。
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運(yùn)輸與保存
常溫運(yùn)輸,。4℃保存，有效期 12 個(gè)月,。
配方表
25mM Tris•HCl,，150mM NaCl，1% NP-40,，0.5% sodium deoxycholate,，pH 7.6
使用方法
貼壁細(xì)胞
1. 取適量裂解液，加入蛋白酶抑制劑混合物(100×,，不含 EDTA) （貨號(hào):AP02L084） 或 PMSF(終濃度為
1 mM,，但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性）。
2. 去除細(xì)胞培養(yǎng)液,，用預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次,。按照 6 孔板每孔加入 150-200ul 的裂解液的比例均勻加
入裂解液，如果細(xì)胞密度過(guò)高可增加裂解液的量至 250-300 uL,?！咀ⅰ浚毫呀庖哼^(guò)少會(huì)使細(xì)胞裂解不
充分，影響蛋白提取的質(zhì)量,。
3. 用槍吹打數(shù)下,，冰上放置 10 min，期間每隔 2 min 用槍吹打數(shù)下,。
4. 轉(zhuǎn)移細(xì)胞裂解液于 1.5 mL EP 管中,。
5. 12,000 g，4℃ 離心 5min,。
6. 收集上清,。
懸浮細(xì)胞
1. 取適量裂解液,，加入蛋白酶抑制劑混合物(100×，不含 EDTA) （貨號(hào):AP02L084） 或 PMSF(終濃度為
1 mM,，但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性）,。
2. 收集細(xì)胞 0.5~2×107于 1.5mL 離心管中，1mL 預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次,，1,000xg 離心 3 min,，棄上清，
重復(fù)三次,。
3. 按照 6 孔板每孔加入 150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液,，如果細(xì)胞密度過(guò)高可增加裂解液的
量至 250-300uL?！咀ⅰ浚毫呀庖哼^(guò)少會(huì)使細(xì)胞裂解不充分,，影響蛋白提取的質(zhì)量。
4. 用槍吹打數(shù)下并劇烈震蕩,，冰上放置 10 min,，期間每隔 2 min 震蕩一次。
5. 12,000 g,，4℃ 離心 5 min,。
6. 收集上清。
組織樣品
1. 把組織jian成細(xì)小的碎片,。
2. 取適量裂解液,，加入蛋白酶抑制劑混合物(100×，不含 EDTA) （貨號(hào):AP02L084） 或 PMSF(終濃度為
1 mM,，但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性）,。
3. 按照每 100mg 組織加入 1mL 裂解液的比例加入裂解液（如裂解不充分可適當(dāng)增加裂解液，如果需要
增加蛋白濃度可適當(dāng)減少使用的裂解液體積）,。
4. 用勻漿器勻漿,，直至充分裂解（為防止蛋白降解請(qǐng)于冰上操作）。
5. 12,000 g,，4℃ 離心 5 min,。
6. 收集上清。
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域。
2. 如需檢測(cè)磷酸化蛋白,，則需要額外添加磷酸酶抑制劑 II cocktail（50×）(貨號(hào):AP03L025) ,。
3. RIPA 裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象,。該透明膠狀物為含有基因組 DNA
等的復(fù)合物,。在不檢測(cè)基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),；
如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,，則可以通過(guò)超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心
取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。如果檢測(cè)一些常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子,，例如 NF-kappaB、p53 等時(shí),，通常不必進(jìn)行超
聲處理,，就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子,。
4. RIPA 裂解液（中）含有較高濃度的去垢劑,，不能用 Bradford 法測(cè)定蛋白。
5. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,，通過(guò)強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分,。
然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使
用勻漿器那樣裂解得比較充分,。
6. 通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150 μL 裂解液已經(jīng)足夠,，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量
到 200 μL 或 250 μL。

表 1: RIPA 裂解液的使用量

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本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域。